Marzieh Salehi 1, Sadegh Babashah 2*, Sirous Zeinali 3. Original Article

Transcription

1 Original Article Expression Levels of Key Components of the Hedgehog Pathway and an Investigation of the Correlation of this Pathway with Expression Levels of Claudin-1 in Invasive Breast Carcinoma Marzieh Salehi 1, Sadegh Babashah 2*, Sirous Zeinali 3 1- M.Sc. Students, Department of Genetics, aculty of Biological Science, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 2- Assistant Professor, Department of Genetics, aculty of Biological Science, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 3- Professor, Department of Molecular Medicine, Biotechnology esearch Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran *Corresponding Address: Postal Code: , Department of Genetics, aculty of Biological Science, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran babashah@modares.ac.ir eceived: 22/eb/2016, Accepted: 01/Jun/2016 Abstract Objective: Breast cancer is considered a heterogeneous disease, characterized by different biological and phenotypic features which make its diagnosis and treatment challenging. We have sought to investigate the expression levels of key components of the Hedgehog signaling pathway, correlation between the signal transducer Smo, and clinicopathologic features (lymph node metastasis and metastasis stage) in invasive breast carcinoma. Also, we examined the inverse correlation between expression levels of Smo and Claudin-1 (an important gene involved in cell tight junctions). Methods: In this case-control study, we assessed 36 pairs of tumor and adjacent normal tissue specimens obtained from patients with invasive ductal breast carcinoma. The expression levels of key components of Hedgehog signaling (Smo, Gli1 and Ptch), Claudin-1, E-cadherin, and MMP2 were measured by qt-pc. The correlations between Smo expression with some clinicopathologic parameters were also analyzed. esults: We found up-regulation of Hedgehog signaling in invasive breast carcinoma samples compared to normal adjacent tissues. Upregulation of the signal transducer Smo correlated with tumor stages and lymph node metastasis of the breast tumors. Interestingly, this correlation was affected by the expression of Her2. A significant correlation existed between expression levels of the signal transducer Smo and Claudin-1, E-cadherin as an epithelial cell marker, and MMP2 as a metastasis-related gene in advanced metastatic tumor samples. Conclusion: Taken together, our study revealed a new layer of molecular complexity which should be considered in the management of patients with invasive breast carcinoma. The results suggested a key role for Hedgehog signaling in invasive breast carcinoma. In terms of the inverse correlation between expression levels of Claudin-1 and Hedgehog signaling, Claudin-1 could serve as a candidate gene in diagnostic studies. Thus, its clinical significance should be further clarified. Keywords: Breast cancer, Hedgehog signaling pathway, Claudin-1, Prognosis Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), No.1, Pages: Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), No. 1 54

2 اصیل مقاله الگ ی یو بیا مسیر کلیدی اعضای مسیر ایه ارتباط بررسی ي Hedgehog با Claudin-1 بیان ژن کارسیى مای در مجاری تهاجمی پستان 3 *2 1 یل زین سیروس باباشاه صادق صالحی مرضیه ی ت سیس علوم دانشکده صنتیک گزوه ارشد کبرشنبسی دانشجوی 1- ی ت سیس علوم دانشکده صنتیک گزوه استبدیبر 2- ایزان تهزان مدرس تزبیت دانشگبه ایزان تهزان مدرس تزبیت دانشگبه ایزان تهزان ایزان پبستور انستیتو بیوتکنولوصی تحقیقبت مزکش مولکولی پششکی گزوه استبد 3- مدرس تزبیت دانشگبه کدپستی: تهزان ایزان مسئول: نویسنده *آدرس babashah@modares.ac.ir صنتیک گزوه سیستی علوم دانشکده چكيذ 94/12/44 مقبله: دریبفت 95/43/12 مقبله: پذیزش ذف: ي ظیا اب ا اه یا اػا ماشا تتاابيه فىا ی ی ي ص ؼات ي ظیا اب ثاب تشيطن ث مبس ث ؾى ان پؼتبن ػشطبن سػابو پ اب تؼا ش یی اذ اؾیاب ث ابو ػاط ثشسػ ث تطبلؿ ا ه. اػ یشد ثشاوگ ض چبلؾ سا ث مبس دستبن ي یخ ق پ ب اوتقبل ث بنی شوذ مشا ي Hedgehog ي ثابل ى ي ظی ب ثشخ ثب Smo پؼتبن ی بخم یبسػ ى تب دس تتبػتبص تشحی ي لىا ؾشيق ث تتبػتبص ت ؿ د. ثشسػ ػی ل ( تحسم ایلباله ت م طن ب اص ) س Claudin-1 طن ي Smo يعاؿ وػ اش آػا تؿاىبخت Her-2 ث ابن طن ثا ه ث ابو تؿسا ع اسیجابم مچىا ه تا پاشداصد. ثا تجاته ث مابسان اص تدابيس ػبلم ثبف ي ی ت س ثبفت وم و خا 36 ث ه دس حبعش ت سد-ؿب ذ تطبلؿ دس ريش ا: ي م اد )Ptch ي Gli1 Smo( Hedgehog سػابو پ اب تؼا ش یی اذ اؾیاب ث ابو ػاط پؼاتبن تدابس ی بخم یبسػ ى تب Claudin-1 پ اب اوتقابل ث بنی شواذ مشا مچى ه ؿذ. ػىد ذ Q-T-PC ی ػط MMP2 ي E-cadherin ؿذ. ثشسػ آػ تؿىبخت ي ثبل ى ي ظی ب ثشخ طن ثبفا ثاب تقب ؼا دس پؼاتبن ی ابخم یبسػ ى تب وم و ب دس Hedgehog سػبو پ ب تؼ ش یىػ م ث ؾ وتب ح وتایح: پ ب اوتقبل طن یىػ م ث ؾ مچى ه داد. وبن سا تدبيس ثاب Smo ػابلم ی ت س اب لىاا ؾاشيق ثا تتبػتبص ي ی ت س پ شفت تشاحل ثب Smo ث ابو ػاط ثا ه تحؼ ػا اسیجابم ثشا ه ؾهي ث د. Her-2 طن ث بو يعؿ اص تتأثش اسیجبم ا ه ي ث د اسیجبم دس پؼتبن MMP2 ي اپا یی ابل( ػای ل وابوگش )طن E-cadherin ػای ل ( ایلاباله دس دخ ال )طن Claudin-1 طن ب ي Smo ؿذ. تهحػ تتبػتبص پ شفت تشاحل ثب ی ت س وم و ب دس تتبػتبص( ثب تشیجط ي ػی ل خبسج تبیش سغ یی ذ )طن تاذ ش دس ثب اذ یا ت لسا ل پ چ ذی اص خذ ذ ػطح تطبلؿ ا ه وتيد گيری: ی ابخم یبسػا ى تب ثا تجاته ث مابسان ی ابخم یبسػا ى تب دس Hedgehog سػابو پ اب تؼا ش یی اذ وقاؾ ثاش وتاب ح داد. وابن سا ؿا د ياقؽ لحبظ ت سد پؼتبن تدبس تا سػاذ ثا وػاش Hedgehog تؼا ش ثاب Claudin-1 طن تؿسا ع ث بو اسیجبم ث ی خ ثب مچى ه داسد. اؿبس پؼتبن ی اشد قاشاس تهحػا تا سد یخ لا تطبلؿابه دس ث اتش ثشسػا اب ثاشا یبوذ اذا ث ؾى ان ت ی اوذ Claudin-1 طن داسد. آ ىذ دس ث تش یحق قبه ث و بص تؼئی ا ه ثبل ى ا م ثىبثشا ه پ ب تؼ ش پؼتبن ػشطبن کليذياشگان: پ ؾآی Claudin-1 Hedgehog سػبو شماره 9 بهار 9315 صفحات: پژوهشهایآسیبشناسیزیستی دوره شناسیزیستی دوره 91 شماره 9 بهار آسیب پژوهشهای 68

3 مقذم ػشاػاش صوابن ثا ه دس ػاشطبن فشايانیش ه پؼتبن ػشطبن ا ه دستبن ي یخ ق تذ ش صت ى دس ت سيد. ث ؿمبس خ بن ت ؿ د بد تختیا آػ تؿىبخت ي ثبل ى ؾ اتل اص ثذخ م ا ه ؼتىذ. ث مبسان ثقب صت ى دس پ ؾآی ا م داسا ی بسؼاگ يعاؿ ی تا س اواذاص ث مابس ػاه ؿبتل ؾ اتل ثا ؾ ستا و ی شوذ اب يعؿ لىا ؾشيق دسی ش Human epidermal ( اوؼبو اپ ذستبل سؿذ ؾبتل ث بنی شوذ بیانیژنClaudin-1 بامسیرHedgehogدرکارسینومایپستان ارتباط ثبفا ي ظی ب ي )growth factor 2: Her2 اػ ی ت س )Grade( دسخ ي )Stage( تشحی وػ اش ؿىبػا یؿ ه ایشچ. ػاشطبن خطش ت ضان یخ ق دس پ ؾآی الگ س تم ب ا ه چبلؾ اب اص س اػ ؿذ ث مبسان ثقب ت ضان ث ج د ثبؾث پ چاذی اب سي ساشد ا اه یا اػا آن صت ى ا ه دس ت م وم د ذ. قشاس وػش تذ سا )Neoplasm( وئ پهػم ش ت لس ل ی ت س تتبػتبص پتبوؼ ل دق ق پ ؾث ى ت سػذ ث وػش ياقؽ دس تذ ش ثشا اػ عشيس پؼاتبن ػشطبن تجته ث مبسان دستبو ي یخ ل.<3-1= سػبو پ ب تؼ ش ػشو ؿ یىتشل طش ق اص ی اػ ؿذ حابغ یسبتی وػش اص تؼ ش Hedgehog یسث ش الگ د ػی ل ت یىذ. ثبص عشيس وق ت ش داسان خى هصا دس یمب ض ي ثقب حاع ي ثبصػبخت ثبفت م ػتبص یىػ م دس ثبلغ ه دس تؼ ش ا ه ثب Hedgehog سػبو پ ب تؼ ش داسد. تبسی ثى بد ػی ل ب )Shh( Sonic Hedgehog= پشيیئ ىا ل گبواذ اب ایلابل ي( Ihh( Indian Hedgehog ی شوذ ت ؿ د. فؿبل Ptch غب ی شوذ ث وب د گش غب ی شوذ ث <)Dhh( Desert Hedgehog تىا یىػ میىىذ Ptch ل گبواذ ایلبل پ دس. اػ Smo ػجت سي ذاد ا ه ت ؿ د. ثشداؿت Smo سي Ptch ت بس اثش Gli1( Gli سيو ؼ ؾ اتل تتؿبقت القب ي Smo ؿسل یغ ش ػاجت سيو ؼا ؾ اتال ا اه فؿبل ت ؿ د. )Gli3 ي Gli2 Gli1 وػ ش Hedgehog ث پبػخگ طن ب سيو ؼ پ جشد Up-( یىػ ما ثا ؾ =7-4>. تا ؿا د Bcl-2 ي D1 ػا سی ه اػ ؿذ یضاسؽ ػشطبن تختیف او اؼ تتبػتبص ا م =10-8>. صتبو )Carcinogenesis( ػشطبنصا دس سػبو پ ب تؼ ش ا ه اص ثؼا بس یا ؿا د ی خ وست ثذ ه ی ت بثذ وم د ث تش Gli1 Shh Smo وػ ش سػبو پ ب تؼ ش ا ه دس دسی ش طن ب ػاشی ةیاش ث ؾى ان Ptch ی شوذ ي صا ػشطبن ث ؾى ان Gli2 =12-10>. ت ومب ىذ ؾمل ی ت س Epithelial to ( تضاوا م ثا اپا یی ابل یازاس فشآ ىاذ اػ فى ی ی یغ ش )mesenchymal transition: EMT ی خطاش ؾبتال ا ث ؾى ان ي اػ اسیجبم دس تتبػتبص فشآ ىذ ثب یغ اش EMT طا ت ؿ د. یشفت وػش دس پؼتبن ػشطبن ثشا E-cadherin اص ث بو N-cadherin ػ ث اپ یی بل( )وبوگش دس یغ اش ػجت سي ذاد ا ه ي ت ؿ د د ذ تضاو م ( )وبوگش فى ی ا یؼات تا ؿا د. ػی ل خبسج تبیش سغ چؼجىذی ؿجب ی بخم ي ظیا اب ا ه ي داسد EMT ثب ثؼ بس ب یحاش افاضا ؾ ي ػی ل ػی ل- ایلباله سفته ث ه اص ؿبتل اػ ؿذ یضاسؽ. اػ ػی ل یب ؾ ثب مشا ی ت س ب ی لىابي غذد ث ث ؿتش ی بخم ي تتبػتبص داسا E-cadherin ث بن ػط دس یغ ش ؾذ ثب ی ت س ب ث وؼج اػ =15-13>. E-cadherin ث بو ایلاباله دس دسی ش پشيیئ ه ب وقؾ ث ه تؼتذل اسیجبم داسد. يخ د ػشطبن یس ه ي ػی ل )Tight junction( تحسم ا دابد دس تحسام ایلاباله ؾمیساشد ي ػابختبس دس یغ اشاه ا اه دس. اػا ؿاذ یضاسؽ تختیف ب اوذا دس یبسػ ى تب اػ ؿذ تخق ساػتب اػ وئ ثهػات فى ی ا ا دبد ثب تؼتق م اسیجبم ایلاباله ا اه وقاق اب غ بة ی Neoplastic ( خابو اد =16>. داسد اپا یی ابل ػای ل اب دس )phenotype تحسام ایلاباله دس دخ ال غب پشيیئ ه ب Claudin ب اػ طو Claudin-1 ت بن ا ه دس. ايل ا یس ه ط ی تختیاف تشاحال طا ث ابن ا ه داسد. ص بد ث بن پؼتبو غذد تطبلؿبه. اػ ؿذ یىػ م ث ؿذه طج ؿ پؼتبو غذد یس ه اودب سد اب ثشخا ي ی ابخم پؼاتبن ػشطبن سي بفت ي ی تا سصا دس Hedgehog سػبو طن ث ابن یبتل فقذان ب یب ؾ ث اؿبس پؼتبن ػشطبن ػی ل پ ب تؼ ش )regulation 47 Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), N

4 مرضیهصالحیوهمکاران ث ابن یب ؾ ا ه ث ه تتقبثی اسیجبم مچى ه داسد. Claudin-1 اػ ؿذ یضاسؽ )ecurrence( ؾ د ي.<20-17= یبسػ ى تب دس Hedgehog سػبو پ ب تؼ ش ی آنخب اص اسیجبم ثشسػ ث حبعش تطبلؿ اػ یىػ م ث ؾ دچبس پؼتبن ثا تتبػتبص ي ث مبس تختیف تشاحل ثب تؼ ش ا ه یىػ م ث ؾ س Claudin-1 طن ی آنخب اص مچى ه ت پشداصد. لىا ؾشيق ػط ت آ ذ ث ؿمبس ػی ل تحسم ایلباله یی ذ اؾیب اص پ اب اوتقبلد ىاذ ی شوذ ي طن ا ه ث بو The signal ( Smo یبسػاا ى تب دس Hedgehog تؼاا ش دس )transducer Smo )Invasive ductal breast carcinoma( پؼتبن تدبس ی بخم ت سػذ ث وػش ت ؿ د. ثشسػ Her-2 تتابيه فؿبل يعؿ ثب Claudin-1 طن ي Hedgehog تؼ ش ث ه ث بو تؿس ع اسیجبم اػ تمسه ا م داسا پؼتبن ػشطبن دس لىا ؾشيق ث تتبػتبص پ ؾث ى ثشا ثبؿذ. ريش ا ي م اد تيماران ي ی ت س ثبفت وم و خا 36 حبعش ت سد-ؿب ذ تطبلؿ دس تدبس ی بخم یبسػ ى تب ث تجته ث مبسان اص تدبيس ػبلم ثبف ثبو اص پؼتبن دس بف )س ( خم ى اتب ث مبسػتبن یبوؼش اوؼت ت ی ت س تا س 95/84 /ه ؿامبس ث وبت ط تطبلؿ ا ه ؿذ. اص وم و ی ش ي سػ ذ پضؿس اخهق یم ت یأ ذ ث 95/10/22. اػ ث د مشا خشاح اص پ ؾ آیب بو سعب تىبت اخز ثب ث مبسان خمیا اص ث مابسان آػ تؿاىبخت ثبل ى - ي ظی ب یضاسؽ اوذاص )ؿبتل )Staging( تشحی ثىذ ي )Grading( دسخ ثىذ ي ست و ی شوذ ب يعؿ لىا ؾشيق يعؿ ی ت س خهك 1 خذيل دس ثبفت وم و ب ثشا )Her-2 ث بن يعؿ ثشسػا صتابن یب تب ؽ و تشيطن دس ثبفت وم و ب. اػ ؿذ ؿذ. وگ ذاس ت لس ل پؼتبن ػشطبن ث تجته ث مبسان آػ تؿىبخت ي ثبل ى ي ظی ب 1 خذيل اتتال سه ت بوگ ه مطخصات تعذاد درصذ /44 ± 1/2 20/7 ± 3/7 50/6 ±3/ )29-77( 48/65 : )تحذيد ( ػبل< 50 ػبل 50 )SD ± )ت بوگ ه قبؾذی ؿشيؼ دس ػه )SD ± )ت بوگ ه صا مبن ايل ه دس ػه یائسگی يضعيت بسؼگ اص قجل بسؼگ اص ثؿذ )SD ± )ت بوگ ه بػئگ صتبن دس ػه رم ن از قثلی استفاد ثی خ ش اوذاز > 3 )ساوتیمتر( ت م ر 3 ) T )مرحل ايلي ت م ر تتش ػبوت 2 : T1 تتش ػبوت 5 2 > : T2 تتش ػبوت 5 > : T شناسیزیستی دوره 91 شماره 9 بهار آسیب پژوهشهای 6:

5 بیانیژنClaudin-1 بامسیرHedgehogدرکارسینومایپستان ارتباط درصذ تعذاد مطخصات N( مرحل ( ای واحي لىفايی غذد NX N0 N1 N3 N4 M( )مرحل دير ف اصل ت متاستاز MX M0 M1 متاستاز تثج تىا لىفی عريق ت ت م ر (Stage) مرحل I + II III + IV استريشن گيروذ يضعيت تىا تثج تخق وب پريشسترين گيروذ يضعيت تىا تثج وبتخق Her2 يضعيت تىا تثج وبتخق Takara( PrimeScript TM cdna سىتس ي تافتی NA استخراج اص یاب NA تطبلؿا تا سد طن اب ث ابن ثشسػ ثشا Tase تؿساا ع وؼااخ ثااشداس ؿذ. اودب طاپه( eal-time PC ياکىص آتش ساب( Invitrogen( یشا اضيل يایىؾیش اص اػتابد ثب ثبف DNA ثاب احتمابل آلا دی حازآ ثا تىػا س ؿذ. اػتخشاج کم ی ؿاذ. ی مابس DNase آواض م ثاب ؿاذ اػتخشاج NA طو ت Gli1 Smo طن اب ثاشا ال گ و ییئ ی ذ آغبصیش ب GAPDH MMP2 E-cadherin Claudin-1 Ptch آیابسص طل سي الستشيفا سص ثاب ؿذ اػتخشاج NA ی ا ي ثاب اػایستشيفت تتش ی ػاط آن خیا ف ي غیػا ي یأ اذ 2 خذيل تطبثق ستاب ي )Specificity( ي ظیا ؿاذ. طشاح ػاىد ذ وابو تتش 280 ي 260 ت ج ب ط ل دس و س خزة افاضاس واش اص اػاتابد ثاب اوؼبن طو دس آغبصیش ب ی ال ث دن ؿذ. اسص بث ) Blast ت سشيیاش 3 تؿسا ع وؼاخ ثاشداس ثاب cdna ػاىتض ؿذ. آواض م ي یلابدف گضاتاش ی ػاط ؿاذ اػتخشاج یب 10 ؿابتل ت سشيل تاش 20 و اب حدام دس يایىا تخیا م NA 49 Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), N0. 1 6;

6 مرضیهصالحیوهمکاران طاپاه( Takara( SYB Green I Master Mix ت سشيل تاش واابو یش 5 ي آة ت سشيل تاش 7 آغابصیش اش اص پ س تا ل 5 اش ثاشا Q-T-PC يایاىؾ ؿاذ. ی ؿذ ػىتض cdna )چشخ Ct ت بوگ ه ي اودب صتبن م ث ك سه ي ػش دي طن دس يایاىؾ ؿاذ. تحبػاج طن اش ثشا آتذ ث دػ آػتبو ( ABI StepOne sequence Detection System دػاتگب صتبو ي دتب ؿشا ط یح آتش سب( Applied Biosystems( دق ق 5 ث تذه ػبوت یشاد دسخ 95 اثتذا دس : بف اودب ص ش ثشوبت ػیغ ؿذ. یشفت وػش دس ايل ياػشؿتگ تشحی ث ؾى ان دتب دس ياػشؿتگ تشحی ؿذ: یسشاس چشخ 40 دس ص ش دتب یسث اش تشحیا ش ثبو. 30 ث تذه ػبوت یشاد دسخ 60 دس 95 ؿبتل ی )Dissociation( یاس تشحی ی ػط یبتل 30 ثشا ػبوت یشاد دسخ 60 ثبو 15 ثشا ػبوت یشاد دسخ ي یدض ا ث تىػا س ثبو 15 ثشا ػبوت یشاد دسخ 95 ي ثبو طن ب ب سيو ؿ تقبد ش. بف ادات رية تىحى یحی ل خبوا داس طن ثا ؾىا ان GAPDH طن ث بن ثب تقب ؼ دس ذآ 2 -ΔΔCt فشت ل اص اػتابد ثب ي )Housekeeping( ؿذ. تحبػج تىحىا ؿا ت اػابع ثاش تطبلؿا ت سد طن ب یسث ش یبسآ تتا ال اب سقا لگابس تم تقابد ش اػبع ثش ی اػتبوذاسد فشت ل تطبثق ت ؿ د یشػ م تتىبغش Ct ب تقبثل دس cdna =21>. ؿذ تحبػج )Efficiency( 10;E -1/slope ی ػاؿ ایلبل/ تشاحل ي ثبو 10 ث تذه ػبوت یشاد دسخ 95 eal-time PC ػىدؾ دس سفت ث یبس ال گ و ییئ ی ذ آغبصیش ب 2 خذيل شن Ptch Smo Gli1 Claudin-1 MMP2 E-cadherin GAPDH تاز( )خفت قغع ع ل ترادف 5 -CGGCAGCCGCGATAAG-3 5 -TTAATGATGCCATCTGCATCCA-3 5 -GTGCTGGCCCCAATCG-3 5 -GCAGCATGGTCTCGTTGATCT-3 5 -GTTCACATGCGCAGACACACT TTCGAGGCGTGAGTATGACTTC-3 5 -TTGGGCTTCATTCTCGCCTT-3 5 -TTGCTTGCAATGTGCTGCTC-3 5 -GGATGCCGCCTTTAACTGGA-3 5 -AGGCACCCTTGAAGAAGTAGC-3 5 -TCATGAGTGTCCCCCGGTAT-3 5 -TCTTGAAGCGATTGCCCCAT TCACCCACTCCTCCACCTTTG-3 5 -TCCACCACCCTGTTGCTGTAG-3 آغازگر داد ا آماری تحليل ي تدسی دي حاذاقل اص تؿ ابس اوحشاآ ت بوگ ه ث ك سه داد ب ي یدض ا ثاشا t-test آصتا ن اص ي ؿذ اسا تؼتقل آصتب ؾ P-value تقابد ش ؿاذ. اػاتابد داد ب یغ شاه آتبس یحی ل ؿذ. یشفت وػش دس تؿى داس آتبس وػش اص 0/05 اص یش ی چ وتایح ريب مىحىی تحليل ي تدسی ي تكثير کارآیی اص طن ب اص ش ثشا یسث ش يایىؾ یبسآ یؿ ه ثشا سق اص اػتابد ثب ی اػتبوذاسد تىحى وم و ب اص تت ال ب یبسآ ب م ي ؿذ اػتابد ث د ؿذ ی ؿذ ػىتض cdna سيو ؿ یسث ش اػا ثشاثاش یقش جب تطبلؿ ت سد ب ا اه یا. اػ طن ب ث بن وؼج اسص بث ثشا یم آصت ن اؾتجبس وبوذ ىذ تحل ل ؿىبػب ثشا ی SYB Green I سوگ ی آنخب اص PC ي ؿذ تتلل سؿت ا دي DNA و ؼ ش ث ت ؿ د اػتابد وذاسد سا اختلبك غ ش اص اختلبك تحل ل یخ ق ی اوب غ اش تحلا ل اب آغبصیش دا مش چ ن ت اسد يخ د ثىبثشا ه ت ؿ د فی سػبو و س ؿذه دس افضا ؾ ػجت و ض اختلبك اطم ىبن ي ؿذ یسث ش قطؿ دسػت یأ ذ ث تىػ س سي ا ه اص =22> شناسیزیستی دوره 91 شماره 9 بهار آسیب پژوهشهای 75

7 Melting ( رية وم داس اص اختلبك غ ش تحل ل يخ د ؾذ اص ايج وقط یى ب يخ د ث ی خ ثب وم داس ا ه دس ؿذ. اػتابد )curve بیانیژنClaudin-1 بامسیرHedgehogدرکارسینومایپستان ارتباط ثا تىحلش رية دتب دس طن ش ثشا ؿذ تب ذ )Peak( 1(. )ؿسل ؿذ تخق PC تحل ل ث دن اختلبك خ دؽ یى ب يخ د تطبلؿ ت سد طن ب رية تىحى ب 1 ؿسل. اػ یسث ش تحل ل ث دن اختلبك د ىذ وبن آن ي ظ رية دتب دس طن ش ثشا ايج وقط 51 Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), N

8 مرضیهصالحیوهمکاران مسدير کليدذی اعضای تيان Hedgehog Claudin-1 مداير سالم تافت ای شن ي ي پسدتان سدرعان وم ود دای در سػبو پ ب تؼ ش یی ذ اؾیب ث بن ت ضان ثشسػ ث تىػ س طن ث بو ػط ثشسػ ي )Ptch ي Gli1 Smo( Hedgehog یا ؿاذ اػاتابد Q-T-PC اص Claudin-1 ػای ل ایلبل ثبف وم و ي ی ت س ثبف وم و خا 36 تىػ س ا ه ثشا غ ش ؿذ. ثشسػ پؼتبن ػشطبن ثب ث مبسان اص ی ت س حبؿ ی ت س ث ابو ػاط اػ ؿذ داد وبن 2 ؿسل دس ی مبنط س سيو ؿ ی تا س وم وا اب دس Ptch ي Gli1 Smo اب تدبيس ی ت س غ ش وم و ب اص ث تش تهحػ ا قبثل ث ط س قبثل ث ط س ی ت س وم و ب دس Claudin-1 ث بن ت ضان ث د. ثبف ث وؼج تهحػ ا ث د. پب هیش تدبيس ی ت س غ ش ب ي Gli1 Smo طن ب سيو ؿ ث بو ػط پؼتبن. ی بخم ػشطبن ی ت س غ ش ي ی ت س وم و ب دس Hedgehog اوس طو تؼ ش یی ذ اؾیب ثبال ث بن 2 ضكل. ثبف ث وؼج ی ت س وم و ب دس Claudin-1 ث بن مچى ه. اػ ث تش تهحػ ا قبثل ث ط س ی ت س وم و ب دس Ptch اػ پب هیش تدبيس ی ت س غ ش ب سيو ؿ ػط دس تحؼ ع یابيه 3 ضكل پ اب تؼا ش یی ذ اؾیب ب ی ت س تتبػتبص تشحی )ة(: لىا ؾشيق ث تتبػتبص )الف(: تتابيه. آػ تؿىبخت ي ثابل ى ي ظیا اب ثاب پؼاتبن تدابس ی ابخم یبسػا ى تب دس Hedgehog سػابن شناسیزیستی دوره 91 شماره 9 بهار آسیب پژوهشهای 75

9 رسدداوی پيددا مسددير فعاليددت بیانیژنClaudin-1 بامسیرHedgehogدرکارسینومایپستان ارتباط Hedgehog در پارامتر ای تا پستان سرعان ت م ری تافت ای مختلف آسيةضىاختی تاليىی ا ش تؼ ا بل فؿ اط ػ بث ه ا ت بم ا سیج ا ا سػ ثش س ا تىػ ثا آػا تؿاىبخت ثبل ى - پبساتتش ب ي Hedgehog سػبو پ ب ثا ه )Gli ي Smo( تؼا ش ا اه یی اذ ؾیا دي ث بن ػط الاف 3 ؿسل دس ی مبنی و ؿذ. ثشسػ تختیف یشي ب ثب ی ت س وم و ب دس Smo طن ث بو ػط ت ؿ د د ذ اخاتهآ ساثطا ا اه دس. اػا ث اتش لىا ؾشيق ث تتبػتبص ثبفا اص V III تشاحال ي II-I تشاحال ثا ه و اض تؿىا داس ث تىػ س مچى ه ة(. 3 )ؿسل داسد يخ د پؼتبن یبسػ ى تب ي Smo طن ثابال ث ابن تابث ه مشا ی ت ع ؼ ا ه یؿ ه ثا دن تىاا اب تثجا يعاؿ ثاب لىاا ؾاشيق ث تتبػتبص طن ث ابن اػ اسیجبم دس پشيطػت و ي اػتشيطو ی شوذ ب مشا ا ؿذ تخق ي ؿذ ثشسػ تختیف ث مبسان دس Smo ی شوذ ب ث بو يعؿ ثب لىا ؾشيق ث تتبػتبص ي Smo طن. و ؼ اسیجبم دس ست و ث بو ػط مچى ه ت یىذ. ومب بن سا )Hedgehog تؼ ش دس ایلاباله ت ام اخاضا اص سا ث ؾىا ان ی Claudin-1 طن وم وا اب دس اػا تطاش اپ یی ابل ػی ل ب دس تحسم تثج Her-2 پؼتبن یبسػ ى تب ثبف ضكل تثج داؿ ی ت س ب ثاب تقب ؼا دس خض افضا ؾ ث دوذ. Her-2 طن ث بن فبقذ ی Her-2 پؼاتبن ػشطبن دس Claudin-1 ي Smo طن ب ث بن ثشسػ 4 تىا Her-2 ث وؼج تثج وم و بHer-2 دس Smo طن ث بو ػط. طن ث ابو ػاط مچىا ه. اػ ث تش ی خ قبثل ث ط س دس Claudin-1 داسد. تىا Her-2 وم و ب ث وؼج خضس افضا ؾ تثج Her-2 وم و ب شن دای تيدان تررسدی پستان سرعان 53 Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), N Smo ي Claudin-1 Her-2 مثثت در سػبو پ ب تؼ ش تثج یىػ م ی داد وبن یزؿت یحق قبه اص خی ی ش ي پؼتبو غذد تىبػت یس ه ثشا Hedgehog Her-2 یا آنخب اص =23>. اػ عشيس ی ت س ؿسلی ش تتبػاتبص پتبوؼ ل ثب تشیجط ؿذ ؿىبخت وبنیش ث ؾى ان آ اب ی وم دوذ ثشسػ حبعش تحققبن اػ پؼتبن ػشطبن دس تثج ث بن یأث ش یح لىا ؾشيق ث تتبػتبص ي Smo ث ه اسیجبم پؼتبن ػشطبن ب ثب تقب ؼ دس ت ی شد. قشاس Her-2 اص تىا ب آن دس ی پؼتبن ی ت س ب ثبف یمب دس تىا Her-2 ث بن ثب پ اذا افاضا ؾ ی خ قبثل ث ط س Smo ث بن ث د تثج Her-2 تابث ه تؿىا داس تثج ساثط وتب ح ا ه 4(. )ؿسل اػ یشد سػبن پ ب ي یی ذ ؾی )ث ؾى ان Smo طن ي Her-2 طن ث بن شن ای تياوی سغ ح تيه ارتثاط تررسی Smo Claudin-1 ي متاسدتاز تدا مرتثظ شن ای ترخی ي )E-cadherin ي MMP2( ث ؾ ت د ذ وبن ی داسد يخ د یضاسؽ ب ی آنخب اص ػای ل اب ی اواب یغ ش ث قبدس Hedgehog تؼ ش یىػ م اخاضا طش اق اص حمیا ي اپا یی ا ث پب جىذ ث ػشطبو -E طن ب ث بو ػط ثشسػ اػ ػی ل خبسج تبیش سغ آن ث بن ی اپ یی بل ػی ل ؿبخق وبوگش )ث ؾى ان cadherin )تتبل پشيیئ ىابص MMP2 ي تا بثاذ( یب ؾ تتبػتبص سيوذ دس دسوم وا ت بثذ( افضا ؾ تتبػتبص سيوذ دس آن ث بن ی یی ذ ث ابن افاضا ؾ ساػتب ا ه دس. یشف قشاس وػش تذ پؼتبن ػشطبن دس پؼاتبن ی تا س وم و اب دس MMP2 ي Smo طن ب ايل تشاحل ث وؼج )IV III )تشاحل تتبػتبص پ شفت تشاحل

10 مرضیهصالحیوهمکاران تا سفا اوتػابس ی مبنی و ي ؿذ تب ذ )II I )تشاحل تشاحال دس E-cadherin طن ي Claudin-1 طن ث ابو ػاط 5(. )ؿسل داؿ یب ؾ ايل تشاحل ث وؼج تتبػتبص پ شفت تتبػاتبص ثاب تاشیجط طن اب ي Claudin-1 ي Smo طن اب ث ابن 5 ضدكل ثبفا دس )E-cadherin ي MMP2( طن ب ث بن تتبػتبص. تختیف تشاحال دس پؼاتبن یبسػا ى تب اب تتبػتبص پ شفت تشاحل دس MMP2 ي Smo داسد. ث تش افضا ؾ )II I )تشاحل ايل تشاحل ث وؼج )IV III )تشاحل طن اب ث اابو ػاط تقبثال دس وؼج تتبػتبص پ شفت تحث تشاحاال دس E-cadherin ي Claudin-1 داسد. یب ؾ ايل تشاحل ث ػشطبن اثش دس تشگ ؾیل ؿب ؽیش ه اص س پؼتبن ػشطبن اػ خ بن ػشاػش صوبن دس ثاب تاشيطن ث مبس ا ث ؾى ان ی اػا ماشا تتاابيه فىا ی ی ي ص ؼت ي ظی ب ا اه ي. اػا یاشد ثشاوگ ض چبلؾ سا ث مبس ا ه یخ ق ي ظی ب ي تتبػاتبص اثش ثش پؼتبن ػشطبن ث تجته بن اص دسكذ 90 حذيد تؼا ش اب ؿىبػاب ثىابثشا ه تا ؿا وذ. تشگ دچبس ی بخم فشك ت ی اوذ فشآ ىذ ا ه دس دسی ش ت لس ل سا خذ ذ ب 25>. =24 آيسد فشا م ثذخ م ا ه دستبن ي یخ ق صت ى دس سػبو پ ب تؼ ش وقؾ سؿذ دس ت م ؾبتی ث ؾى ان Hedgehog یبسػا ى تب ث ي اظ تختیف ػشطبن ب دس ی ت س ی ػؿ ي تؼ ش ا ه ث بن ث ؾ اص ی ث ط س اػ سػ ذ اثجبه ث پؼتبن ػاشطبن ػی ل اب یسث ش ثشا پ ؾو بص ث ؾى ان سػبو پ ب مسابسان ي )Kasper( یبػیش ساػتب ا ه دس ت ؿ د. بد پؼتبن سػاابو پ اب تؼا ش ت ابس یا دس بفتىاذ 2009 ػابل دس =26> اػ تمسه پؼتبن ی ت س ب دس Hedgehog دي ا اه ػاجت ثبؾاث ی تا س اػاتشيتب دس یغ اش ثاب ا هی ايل ؿ د وت د قاذسه ا اهیا د گش ي ت ؿ د ػشطبن پ شف دس یذاخل یاب ؾ سا ی ت س ثبف دس ػشطبو ثى بد ػی ل ب حاع ت د ذ. تتبػاتبص یىػ م دس Hedgehog تؼ ش یی ذ وقؾ دل ل ث یی ذ اؾیب ث بو ػط ثشسػ ث تطبلؿ ا ه پؼتبن ػشطبن تدابس ی بخم یبسػ ى تب ث مبسان دس سػبو پ ب تؼ ش ا ه تتبػتبص فشآ ىذ دس دسی ش طن ب ث بن مچى ه. پشداخ پؼتبن ثا ه تحسام ایلاباله دس دسی اش ت م )طن Claudin-1 ؿبتل اپ یی بل( ػی ل ؿبخق وبوگش )ث ؾى ان E-cadherin ػی ل ( MMP2 ي ثشسػ تتبػتبص( فشآ ىذ سيوذ دس یی ذ )تتبل پشيیئ ىبص یىػ م ث ؾ تبث ه اسیجبم حبعش تطبلؿ دس ا ه ثش افضين ؿذ. تتبػاتبص پتبوؼ ل ثب Claudin-1 طن یب ؾ بفت ث بن ي Smo ؿذ. ثشسػ پؼتبن یبسػ ى تب دس بفت افضا ؾ تؼ ش دس دسی ش طن ب ث بن ی داد وبن تطبلؿ ا ه وتب ح ثا طا س Gli1 ي Smo Ptch ؿابتل Hedgehog سػابو پ ب ثبف دس تؿى داس ثبف ا ه دس Claudin-1 طن ث بن اػ بفت افضا ؾ پؼتبن ػشطبن ب و ض ي داد. وبن تؿى داس یب ؾ ب ػابل دس ی ث ط س ث د پ ه تطبلؿبه ثب ػبصیبس بفت ا ه ث ابو ػاط تقب ؼا ثاب =20> مسابسان ي )Lu( لا 2013 ث ابو ػط ی دس بفتىذ پؼتبن ػشطبن او اؼ دس ب Claudin اسیجبم دس ث مبس ؾ د ي تتبػتبص پذ ذ ثب ق ب Claudin پب ه )Predictor( پ ؾی ؾبتل ث ؾى ان طن ا ه ث بن اص ي اػ ي )Kubo( ی ثا مچىا ه یشدواذ. ابد ث مابس ؾا د ثشا تؼاا ش بفتا افاضا ؾ ث ابو ػااط یاضاسؽ ثاب مسابسان ثبف دس Hedgehog ا اه اص پؼاتبن ػاشطبن ث تجته ث مبسان ػاشطبن ثا تجته ث مبسان دستبن دس و ه ذف ث ؾى ان تؼ ش تؼا ش دسی اش ثا ی خا ثاب ثىبثشا ه =27>. یشدوذ بد پؼتبن ا اه تتبػتبص فشآ ىذ دس Claudin-1 ي Hedgehog سػبو پ ب شناسیزیستی دوره 91 شماره 9 بهار آسیب پژوهشهای 76

11 بیانیژنClaudin-1 بامسیرHedgehogدرکارسینومایپستان ارتباط تؼا ش یىػ ما ث ؾ تؿى داس اسیجبم وبند ىذ ت ی اوذ وتب ح ػاشطبن دس Claudin-1 ث بن یب ؾ ي Hedgehog سػبو پ ب یا دس بفتىاذ حبعاش تحققابن مچى ه ثبؿذ. ی بخم پؼتبن ثا تتبػاتبص ی ؿذ د ذ ث مبساو دس Smo ثبالیش ث بو ػط ث دواذ. تتبػتبص اص پ شفت یش تشاحل دس ي داسوذ لىا ؾشيق پ اى بد یا اػا قجیا یاضاسؽ اب ثب ػبصیبس داد ب ا ه ث مابسان ثقاب ثاب Hedgehog تؼا ش یىػ ما ث ؾ وم د اوذ. اػ اسیجبم دس پؼتبن یبسػ ى تب ػاشطبن اب دسكاذ 30 اص ث ؾ دس Her-2 طن ث بن ث ؾ وؼاج ثا پا ؾآی ا اتاش ا ه ی اػ ؿذ ؿىبػب پؼتبن وابوگش Her-2 یا آنخب اص =28>. داسد ث مشا سا عؿ ا پؼتبن ػشطبن دس تتبػتبص افضا ؾ پتبوؼ ل ثب ؿذ ؿىبخت ص ؼت ث ه اسیجبم آ ب ی پشداخ وست ا ه ثشسػ ث تطبلؿ ا ه اػ اب تثجا ث بن اص تتأثش لىا ؾشيق ث تتبػتبص ي Smo طن ث بن ث بن تمسه مشا ثشسػ صت ى دس خ ش. ب اػ Her-2 تىا ث بن داسا ی ت س ب ثبف ی ؿذ تب ذ Her-2 ي Smo ػاط تىاا داسا Her-2 اب ثبفا ثاب تقب ؼ دس Her-2 ت یىاذ پ ى بد وتب ح ا ه ث د. Smo اص ث تش ب سيو ؿ ثشا دل ی اػ تمسه پؼتبن ػشطبن دس Her-2 سػبو پ ب ی ثبؿذ. Smo طن تحؼ ع یىػ م ث ؾ ػاشطبن اب دس اغیات E-cadherin بفتا یاب ؾ ث بن سيوذ ثب تحؼ ػ ث ط س آن فقذان ي اػ ؿذ یضاسؽ ت بخم =15-13>. اػا تاشیجط )EMT( تضاوا م ثا اپ یی ابل یزاس اص ؿابتل EMT ثب ب ؿجب داسا ی بخم فى ی یؼت ػی ل یحش افضا ؾ ي ػی ل ػی ل- چؼجىذی سفته دػ -E طن ث ابن دس ػا EMT طا. اػ )Cell mobility( ػای ل )وابوگش N-cadherin طن ث ابن ػا ث cadherin اص =14>. تا ؿا د ػی ل تبیش سغ دس یغ ش ػجت تضاو م ( یا داؿات اػا آن ثاش اؿابس یزؿات تطبلؿابه ی آنخب دس ػشطبو ػی ل ی اوب یغ ش ثبؾث Hedgehog سػبو پ ب ت ؿ د ػی ل خبسج تبیش سغ ث ی بخم ي اپ یی ث ایلبل ایلباله دس دسی ش ت م )طن Claudin-1 طن ب ث بو ػط ؿابخق وابوگش )ث ؾى ان E-cadherin ػی ل ( ث ه تحسم سيواذ دس یی اذ )تتبل پشيیئ ىابص MMP2 ي اپ یی بل( ػی ل تثجا اسیجابم اوتػابس تطابثق ؿاذ. ثشسػا تتبػاتبص( فشآ ىاذ دس MMP2 ي Smo طن اب ث ابو ػاط ثا ه تؿىا داس ؿب بن ؿذ. د ذ تتبػتبص پ شفت تشاحل ثب ی ت س وم و ب ي E-cadherin طن ااب اواذ ث ابو ػااط یا آن ریاش تتبػاتبص پ شفت تشاحل ثب ی ت س وم و ب دس Claudin-1 ث د. مشا Smo اص بفت افضا ؾ ث بو ػ ثب پ چ اذی اص خذ اذ ػاطح حبعاش تطبلؿ تدم ؼ دس تاذ ش دس ثب ذ ی ت لس ل ی ابخم یبسػا ى تب ث مابسان ثىبثشا ه. ػبخ آؿسبس سا ی شد قشاس ی خ ت سد پؼتبن تدبس دس Hedgehog سػبو پ ب تؼ ش تح س وقؾ ث تش ؿىبػب صت ى دس سا ث تش حقب ق پؼتبن تدبس ی بخم یبسػ ى تب ث وػش ساػتب ا ه دس وم د. خ ا ذ آؿسبس پؼتبن ػشطبن پ شف پ اب اوتقابل یىػ ما ی شواذ ثا ؾ تا سػاذ تؼا ش دس Smo ایلابل یی اذ طن ثب آن تؿس ع ث بو اسیجبم ي Hedgehog دس ثذ پ ؾآی ثبؾث اػ تمسه Claudin-1 ػی ل تحسم ثبل ى ا م ایشچ ثبؿذ پؼتبن تدبس ی بخم یبسػ ى تب داسد. ث تش یحق قبه ث و بص تؼ ش ا ه قذرداوی ي تطكر سؿت اسؿذ یبسؿىبػ وبت پب بن اص ثشیشفت حبعش تطبلؿ تذسع یشث داوگب تبل پت جبو ثب ي اػ ت لس ل طوت وؼج سا خ د قذسداو تشایت و ؼىذیبن. اػ ؿذ اودب ث ت داسوذ. اؾه تذسع یشث داوگب پظي تحتش تؿبيو مىاتع [1] Siegel, Ma J, Zou Z, Jemal A. Cancer statistics, CA Cancer J Clin 2014; 64(1): 55 Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), N

12 9-29. [2] Goldhirsch A, Ingle JN, Gelber D, Coates AS, Thürlimann B, Senn HJ; Panel members. Thresholds for therapies: highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the primary therapy of early breast cancer Ann Oncol 2009; 20(8): [3] Galea MH, Blamey W, Elston CE, Ellis IO. The Nottingham Prognostic Index in primary breast cancer. Breast Cancer es Treat 1992; 22(3): [4] Duman-Scheel M, Weng L, Xin S, Du W. Hedgehog regulates cell growth and proliferation by inducing Cyclin D and Cyclin E. Nature 2002; 417(6886): [5] Nehmé, Mus-Veteau I. Proteins of the Hedgehog signaling pathway as therapeutic targets against cancer. Expert ev Proteomics 2010; 7(4): [6] Varjosalo M, Taipale J. Hedgehog signaling. J Cell Sci 2007; 120(Pt 1): 3-6. [7] Yang L, Xie G, an Q, Xie J. Activation of the hedgehog-signaling pathway in human cancer and the clinical implications. Oncogene 2010; 29(4): [8] Wang, Ma L, Zhang Z, Liu X, Gao H, Zhuang Y, Yang P, Kornmann M, Tian X, Yang Y. Hedgehog Signaling egulates Epithelial- Mesenchymal Transition in Pancreatic Cancer Stem-Like Cells. J Cancer 2016; 7(4): [9] Hanna A, Shevde LA. Hedgehog signaling: modulation of cancer properies and tumor mircroenvironment. Molecular Cancer 2016; 15: 24. [10] Borah A, aveendran S, ochani A, مرضیهصالحیوهمکاران Maekawa T, Kumar DS. Targeting self-renewal pathways in cancer stem cells: clinical implications for cancer therapy. Oncogenesis 2015; 4: e177. [11] Palle K, Mani C, Tripathi K, Athar M. Aberrant GLI1 Activation in DNA Damage esponse, Carcinogenesis and Chemoresistance. Cancers (Basel) 2015; 7(4): [12] Babashah S1, Sadeghizadeh M, Hajifathali A, Tavirani M, Zomorod MS, Ghadiani M, Soleimani M. Targeting of the signal transducer Smo links microna-326 to the oncogenic Hedgehog pathway in CD34+ CML stem/progenitor cells. Int J Cancer 2013; 133(3): [13] riedl P, Wolf K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat ev Cancer 2003; 3(5): [14] Lee JM, Dedhar S, Kalluri, Thompson EW. The epithelial-mesenchymal transition: new insights in signaling, development, and disease. J Cell Biol 2006; 172(7): [15] Wheelock MJ, Shintani Y, Maeda M, ukumoto Y, Johnson K. Cadherin switching. J Cell Sci 2008; 121(Pt 6): [16] Martin TA. The role of tight junctions in cancer metastasis. Semin Cell Dev Biol 2014; 36: [17] Myal Y, Leygue E, Blanchard AA. Claudin 1 in breast tumorigenesis: revelation of a possible novel "claudin high" subset of breast cancers. J Biomed Biotechnol 2010; 2010: [18] Zhou B, Moodie A, Blanchard AA, Leygue شناسیزیستی دوره 91 شماره 9 بهار آسیب پژوهشهای 78

13 2013; 18(2): [24] Visvader JE. Keeping abreast of the mammary epithelial hierarchy and breast tumorigenesis. Genes Dev 2009; 23(22): [25] Wu Y, Sarkissyan M, Vadgama JV. Epithelial-Mesenchymal Transition and Breast Cancer. J Clin Med 2016; 5(2). pii: E13. [26] Kasper M, Jaks V, iaschi M, Toftgard. Hedgehog signalling in breast cancer. Carcinogenesis 2009; 30(6): [27] Kubo M, Nakamura M, Tasaki A, Yamanaka N, Nakashima H, Nomura M, Kuroki S, Katano M. Hedgehog signaling pathway is a new therapeutic target for patients with breast cancer. Cancer es 2004; 64(17): [28] Slamon DJ, Godolphin W, Jones LA, Holt JA, Wong SG, Keith DE, Levin WJ, Stuart SG, Udove J, Ullrich A. Studies of the HE-2/neu proto-oncogene in human breast and ovarian cancer. Science 1989; 244(4905): بیانیژنClaudin-1 بامسیرHedgehogدرکارسینومایپستان ارتباط E, Myal Y. Claudin 1 in Breast Cancer: New Insights. J Clin Med 2015; 4(12): [19] Kwon MJ. Emerging roles of claudins in human cancer. Int J Mol Sci 2013; 14(9): [20] Lu S, Singh K, Mangray S, Tavares, Noble L, esnick MB, Yakirevich E. Claudin expression in high-grade invasive ductal carcinoma of the breast: correlation with the molecular subtype. Mod Pathol 2013; 26(4): [21] Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PC and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods 2001; 25(4): [22] Wong ML, Medrano J. eal-time PC for mna quantitation. Biotechniques 2005; 39(1): [23] Lee MY, Sun L, Veltmaat JM. Hedgehog and Gli signaling in embryonic mammary gland development. J Mammary Gland Biol Neoplasia 57 Pathobiology esearch, Vol. 19 ( ), N