Original Article Comparison of snrna-u6 and microrna-16 for Identification of Suitable Endogenous Control Gene for microrna Gene Expression Analysis under Dendrosomal Curcumin Treatment in Hepatocellular Carcinoma Cell Lines Mina Zamani 1, Majid Sadeghizadeh 2*, Mehrdad Behmanesh 3 1- M.Sc., Department of Genetics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 2- Professor, Department of Genetics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 3- Associated Professor, Department of Genetics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran *Corresponding Address: P.O.Code: 1411713116, Department of Genetics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Email: sadeghma@modares.ac.ir Received: 25/Jun/2014, Accepted: 27/Dec/2014 Abstract Objective: MicroRNAs (mirnas) are single-stranded small RNAs 18-25 nucleotides in length that regulate gene expression through translational inhibition and mrna cleavage. Aberrant expression of mirnas contribute to several diseases. This has increased interest in profiling the expressions of these molecules. Real-time quantitative PCR (RQ-PCR) is a sensitive, quantitative technique for gene expression assessment. To correct for systematic variables such as the amount of starting template, RNA quality and enzymatic efficiencies, RQ-PCR data is commonly normalized to an endogenous control gene which is stably-expressed across the test sample set. To avoid occurring further error in the quantification of gene expression data, it is necessary that candidate endogenous controls be validated in the samples of interest. In this study the expression of mirna-16 and small nuclear RNA (snrna)-u6 in hepatocellular carcinoma (HCC) cell lines under dendrosomal curcumin treatment were evaluated to identify appropriate endogenous controls for dendrosomal curcumin-related mirna expression assays. Methods: HCC cell lines were treated with dendrosomal curcumin. Dendrosomal curcumin entry into HepG2 and HuH-7 cells was assessed by fluorescent microscopy images. RNA was extracted and cdna, after polya polymerization, was synthesised. Then, we performed gene expression assays using RQ-PCR. Results: In this treatment condition, mirna-16 for HepG2, snrna-u6 and the combined mirna-16 and snrna-u6 for HuH-7 were suitable endogenous controls. Conclusion: These genes are appropriate endogenous controls for mirna expression assays in HCC cell lines under treatment with dendrosomal curcumin. There are stable, non-significant expression changes of these genes. Keywords: microrna, RQ-PCR, Endogenous control genes, Dendrosomal curcumin, Hepatocellular carcinoma Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), No. 1, Pages: 67-82 67 Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vo.l 18 (2015-2016), No. 1 76
مقال اصیل مقايسة snrna-u6 ي microrna-16 برای تعییه ژن کىترل درينزاد مىاسب برای بررسی بیان ژن ای microrna تحت تیمار ک رک میه دودريزيمی در رد ای سل لی سرطان کبد 3 *2 یزاده مهرداد بهمنش 1 مینا زمانی مجید صادق چكيذ 1- کبرشنبسی ارشد گزوه ژنتيك دانشكده علوم سيستی دانشگبه تزبيت مدرس تهزان ايزان 2- استبد گزوه ژنتيك دانشكده علوم سيستی دانشگبه تزبيت مدرس تهزان ايزان 3- دانشيبر گزوه ژنتيك دانشكده علوم سيستی دانشگبه تزبيت مدرس تهزان ايزان *آدرس نويسنده مسئول: ايزان تهزان کدپستی: 1411113111 دانشگبه تزبيت مدرس دانشكده علوم سيستی گزوه ژنتيك Email: sadeghma@modares.ac.ir دريبفت مقبله: 93/44/44 ذف: microrna ب RNA ب ٢ و چه ته سؿت ا ٢ ثب پذيزش مقبله: 93/14/41 25-18 و ئ ت ٥ ذ اػت و ثاب ابس تشخ ا ثاشؽ mrna دس ت ظ ٥ ث ٥ ب ط ؿشوت داسد. ث ٥ ب ب دبس microrna ب اص ػ ا سخذاد ث ٥ بس ٢ ب ٢ خت ف اػت وا ا ٤ ا ؼائ ػ لا ث ثشسػ ٣ ب ١٤ ث ٥ ب آ ب سا افاض د اػات. RQ-PCR تى ٥ ىا ٣ و یا ٣ اؼابع دس ثشسػا ٣ ث ٥ اب ط بػات. ثاشا ٢ تلا ٥ تغ ٥٥ شات ػ ٥ ؼت بت ٥ ه اص خ ٥ ضا ا ٢ آغبص ٤ و ٥ ف ٥ ت RNA وبسآ ٣٤ آ اض ٤ اب داد اب ٢ RQ-PCR ؼاجت ثا ٤ اه ط و تش دس صاد و دس د ػ ب ٢ آص ث س پب ٤ ذاس ث ٥ اب ا ٣ ؿا د اػاتب ذاسدػابص ٢ ا ٣ ؿا د. ثاشا ٢ خ ا ٥ ش ٢ اص سخذاد خ ب ب ٢ ث ٥ تش دس ص ١ ٥ و ی ٣ ػبص ٢ داد ب ٢ ث ٥ ب اسص ٤ ابث ٣ ط اب ٢ و تاش دس صاد وب ذ ٤ اذ ثاشا ٢ اش ا ١ آص اب ٤ ؾ هش س ٢ اػت. دس ا ٤ ب ؼ ث ٥ ب ط ب ٢ microrna-16 snrna-u6 دس سد ب ٢ ػ ٣ ػش ب ٣ وجذ ت ات ت ٥ ابس ثاب و سو ٥ د ذس ص ٣ ث ظا س تؼ ٥ ا ٥ و تاش دس صاد بػات ثاشا ٢ ب ؼابت ػا دؾ ث ٥ اب microrna اب اشتجي ثاب و سو ٥ د ذس ص ٣ اسص ٤ بث ٣ ؿذ. م اد ي ريش ا: سد ب ٢ ػ ٣ سد ظش ت ػي و سو ٥ د ذس ص ٣ ت ٥ بس ؿذ ذ. س د و سو ٥ د ذس ص ٣ ث سد اب ٢ ػ ٣ HuH-7 HepG2 ثب تل ٤ شثشداس ٢ ت ػي ٥ ىش ػاى ح ف سػا ت ثشسػا ٣ ؿاذ. RNA اص ا اب ٢ ا سد ظاش اػتخشاج ػ تضcDNA ثب س ؽ افض د د پ ٣ A ا دب ؿذ. ػپغ ت ػي س ؽ RQ-PCR ػ دؾ ث ٥ ب ك ست شفت. وتایج: تب ٤ ح ب داد ٤ ب U6 تشو ٥ جا ٣ اص mirna-16 U6 ثاشا ٢ HuH-7 mirna-16 ثاشا ٢ HepG2 دس ا ٤ ا ؿاشا ٤ ي ت ٥ بس ثشا ٢ ط و تش دس صاد بػت اػت. وتيج گيری: دس د ع ٣ ت ا اص ا ٤ ط ب ٢ و تش دس صاد ث د ٥ ػذ تغ ٥٥ ش ث ٥ ب ؼ ٣ داس پب ٤ ذاس ٢ ث ٥ ب ثا ٥ ا اب ٢ آص ثشا ٢ ػ دؾ ث ٥ ب microrna ب ت ت ت ٥ بس ثب و سو ٥ د ذس ص ٣ دس ا ٤ سد ب ٢ ػ ٣ اػتفبد وشد. کليذياشگان: RQ-PCR microrna ط و تش دس صاد و سو ٥ د ذس ص ٣ ػش ب وجذ مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 صفحات: 88-76 مقذم وف RNA ب ٢ و چه دس ٤ وبس ٤ ت ب فب ٣ ػظ ٥ ث د و ثب وف ٥ ىش RNA ب mirnas( ٤ ب )mirs مؾ آ ب دس و تش تشخ اص ػب 1993 ؿش ع ث ص ٤ ذ وشد 20 ػب اػت و ادا داسد ؿذت ٤٣ بثذ. mir اب RNA اب ٢ 68 مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 8:
شن کىترل درينزاد در مطالعات بیان mir ا تحت تیمار با ک رک میه غ ٥ ااش وااذ ؿاا ذ 25-18 و ئ ت ٥ ااذ ٢ سد ٠ خذ ٤ ااذ ٢ اص ى ب ٢ و چه RNA غ ٥ ش وذ و ذ دس صاد اػات وا ث ٥ ب ط سا دس ػ پغ اص س ٤ ؼ ٣ اص ش ٤ ك تدض ٤ mrna ٤ ب بس تشخ ا آ ت ظا ٥ ا ٣ ب ٤ اذ =1 2>. اص ص اب واف RNA ب ٢ و چه غ ٥ ش وذ و اذ lin-4 let-7 )وا ا اش ص ث ػ ا mir ؿ بخت ا ٣ ؿا د( دس وبن بثاذ ٤ ت ٥ غ ا اب غ elegance( )Caenorhabditis 3= <4 تبو كاذ ب تا ا ٣ mir دس دا ػ ٥ ؼ ٣ اص خ دات اص ٥ ب ب تب ا ؼب ؿ بخت ؿذ اػت. ثشا ٢ ط ا ؼاب 1000 ط س اض و اذ mir وا اذ دا ٤ ه دسكذ ط سا ؿب ٣ ؿ د تخ ٥ صد ٣ ؿ د. ث ظش ٣ سػذ ا ٤ mir ب ت ظ ٥ ث ٥ ب ٤ ه ػ ط ا ؼب ٣ سا ثش ػ ذ داؿت ثبؿذ. ش mir تمش ٤ جب 200 س ؿت سا ثا ا س ؼتم ٥ ٤ ب غ ٥ ش ؼتم ٥ ذف لشاس ٣ د ذ ا ٤ دس اب ٣ اػات و ٤ ه ط س ض و ذ پش تئ ٥ ٥ ض ٣ ت ا ذ ثب ث ٥ ؾ اص ٤ ه mir ت ظ ٥ ؿ د =5>. مؾ و ٥ ذ ٢ mir ب ث ػ ا ت ظ ٥ و ذ اب ٢ فشآ ٤ اذ ااب ٢ خت ااف ػاا ٣ ظ ٥ ااش ص ااب ث ااذ ٢ تىاا ٣ ٤ Timing( )Developmental ت اب ٤ ض ثابفت ٣ تىث ٥ اش ػاا ٣ تى ٤ ا ذا تذا ت ا ب ٣٤ ػ ث ٥ بد ٢ )ص ب ث اذ ٢ تىا ٤ : )Developmental Timing شي ػ ٣ ثش ب س ٤ اض ٢ ؿاذ )Metastasis( ت س صا ٣٤ ت بخ تبػاتبص )Apoptsis( سيصا ٣٤ ث اثجبت سػ ٥ ذ اػت =4 6>. ث ٥ ب بثا خاب ٢ mir اب ث د ٥ تغ ٥٥ شات ط ت ٥ ه اپ ٣ ط ت ٥ ه مق دس بؿ ٥ پاشداصؽ آ ب دس ثؼ ٥ بس ٢ اص ػش ب ب ٢ ا ؼب ٣ ضاسؽ ؿاذ اػات ؿ ا ذ ؼتذ ٣ دس ا ٤ ص ٥ ج ٣ ثاش ماؾ و ٥ اذ ٢ mir اب ث ػ ا ط ػش ب صا ٤ ب ػشو ة ش ت س دس ت ػؼ ثؼ ٥ بس ٢ اص ثذخ ٣ ٥ ب ٢ ا ؼب ٣ خا د داسد =9-7>. ا ٤ ا ىا اب دس ػش ب صا ٣٤ وجذ و اص ػش ب ب ٢ ثب تخ ٥ ق هؼ ٥ ف مب ث دس ب اػت =10> مؾ لبث ت خ ٣ ثبص ٢ ٣ و ذ =11-18>. ث د ٥ ػذ پبػخ ث دس ب بػت دس ػش ب وجذ اػتفبد اص س ؽ ب ٢ دس ب ٣ خذ ٤ ذ ٣ ت ا ذ ا ٥ ات داؿات ثبؿاذ. اص س ؽ ب ٢ دس ب ٣ اب ابهش سد ت خ ٣ ت ا ث اػتفبد اص تشو ٥ جبت غزا ٣٤ ػ ت ٣ ص ٤ ؼتفؼب ؼتخشج اص ٥ ب ب تشو ٥ ت آ ب ثاب س ؽ اب ٢ ا ٤ دس اب ٣ اؿابس واشد. و سوا ٥ Curcuma ( ؼتخشج اص ٥ ب و سو ب اب )Curcumin( )Longa ٤ ى ٣ اص ا ٤ تشو ٥ جبت اػت و ثب اػتفبد اص ب اب ب فبنك آ ذ ثش ى ا ٥ ت هؼف آ دس س د ث ػ ٣ ت ا ذ ا تخبة بػاج ٣ دس دس اب ػاش ب اب ٢ ماب ثا دس ب ب ٢ خ د ثبؿذ. ب س و ػاش ب ٤ اه ث ٥ ابس ٢ چ ذػب ٣ اػت ثاشا ٢ دس اب آ ثا تشو ٥ جابت ٣ وا ت ا اب ٣٤ ذف ٥ ش ٢ اخضا ٢ تؼذد دس ػ ٣ سا داسد ٥ بص ذ ٤. اغ ت تشو ٥ جبت ؿ ٣ ٥ دس ب ٣ اب ابهش ٤ ه ذف دس ػ ٣ داسد ا ٤ دس اب ٣ اػت و آغبص پ ٥ ش ٢ ػش ب ثاب اخات دس كذ ب ط ؼ ٥ ش ب ٢ پ ٥ ب سػب ٣ شا اػت و ب د اذ ٠ ٥ بص جش ث داس ب ٣٤ ثب چ ذ ٤ ذف ثشا ٢ غ جا ثاش ػاش ب اػت. اص آ خب ٣٤ و و سو ٥ ت ا ب ٣٤ ت ظ ٥ ؼ ٥ ش ب ٢ دس ػاا ٣ خت فاا ٣ سا داسد ا تخاابة بػااج ٣ ثااشا ٢ دس ااب پ ٥ ؾ ٥ ش ٢ اص ػش ب اػت. تشو ٥ ات و سوا ٥ ب اب ا د ذس ص ٣ ث ب و سو ٥ د ذس ص ٣ ٤ اب اب و سو ٥ ثشاػبع ب ؼبت ا داب ؿاذ ت ػاي مماب ابهاش آثابس ؼ ٣ داس ٢ دس بس ػش ب ث ك ست دس ثذ vivo( )in دس ا ٥ ي آص ب ٤ ا ب ٣ vitro( )in اب داد اػات =28-19>. ث بثشا ٤ ت م ٥ مبت ث ٥ تش ثشا ٢ س ؿ ػبص ٢ شچ ث ٥ اتش تایث ٥ ش ب و سو ٥ دس ؼ ٥ ش ب ٢ تؼذد ػ ٣ ٣ ت ا ذ پ ٥ جشد ٢ دس ساػتب ٢ اػتفبد ٠ ثب ٣ ٥ ا ٤ تشو ٥ ت ثبؿذ. تب ث اب ت م ٥ م ٣ ج ٣ ثش تؼ ٥٥ و تش دس صاد بػت دس ػا اب ٢ ػاش ب وجاذ ك ست شفت اػت چ ٥ ثشسػ ٣ استجبى ب و سو ٥ ب ١٤ ث ٥ ب mir دس ػش ب وجذ ب ؼ ذ اػات. تؼ ٥ ا ٥ ط و تش دس صاد بػت مذ ا ٢ ثش چ ٥ ب ؼا ا ٢ اػات. ثاب ت خ ث ب ؼبت فشا ا دس ص ١ ٥ تؼ ٥ ا ٥ ط و تاش دس صاد ٤ ه و تش دس صاد تشن ثشا ٢ ا اع ثبفت ت ٥ بس ٤ ب ث ٥ بس ٢ ب ؼ ٥ ذ اػت ث بثشا ٤ ثشا ٢ خ ٥ ش ٢ اص سخاذاد خ اب دس ص ١ ٥ و ی ٣ ػبص ٢ داد ب ٢ ث ٥ ب اسص ٤ بث ٣ ط ب ٢ و تش دس صاد وب ذ ٤ ذ ثشا ٢ ش ١ آص ب ٤ ؾ هش س ٢ اػت. د ط و تش داخ ٣ شػاا microrna-16 small nuclear ( snrna-u6 69 Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), N0. 1 8;
میىا زماوی ي مکاران )RNA دس ب ؼبت ص ٤ بد ٢ ث ػ ا و تش دس صاد اسص ٤ بث ٣ اػتفبد ؿذ اػت =37-29> چ ٥ U6 دس ب ؼ ا ٢ ت ػي ممب ابهش ث ػ ا و تش داخ ا ٣ دس سد ٠ ػا ٣ ٥ اب )Glioma( ت ت ت ٥ بس ثب ب و سو ٥ ثاشا ٢ ثشسػا ٣ ث ٥ اب mir اػتفبد ؿذ اػت =21>. دس ت م ٥ ك ابهش ٥ ض ث ٥ ب ا ٤ د ط دس سد ااب ٢ ػاا ٣ ػااش ب ٣ وجااذ ت اات ت ٥ اابس ثااب اب و سو ٥ ثاشا ٢ ثشسػا ٣ و تاش دس صاد بػات ثاشا ٢ ب ؼابت ػاا دؾ ث ٥ ااب microrna اب ااشتجي ثااب ت ٥ اابس ب و سو ٥ دس ػش ب وجذ اسص ٤ بث ٣ ؿذ. م اد ي ريش ا ساخت حامل دوذريزيمی د ذس ص ب ) ٥ ؼ ب ٢ پ ٥ ؿاذ اتك اص اااذ ب ٢ اػ ٥ ذ چشة ا ئ ٥ هاػ ٥ ذ اػت( ثشا ٢ ا ٥ ثبس دس ا ٤ شا ت ػي ش ت م ٥ مبت ٣ ابهش شاا ٣ ػابخت ؿاذ اػات. ا ٠ آ بد ػبص ٢ ب و سو ٥ د ذس ص ٣ دس ب ؼ ب ٢ لج ٣ ا ٤ ممب ت ه ٥ داد ؿذ اػت =20 21>. کطت سل ل دس ت م ٥ ك ابهش اص سد ب ٢ ػا ٣ HuH-7 HepG2 پبت ب )خش ٤ ذاس ٢ ؿذ اص ثب ه ػ ٣ ا ؼت ٥ ت پبػت س ا ٤ اشا ( اػتفبد ؿذ. ػ ب دس ٥ ي وت Dulbecco's ( DMEM )Modified Eagle's Medium اب ٢ 10 دسكذ ػش خ ا ٥ ب ٢ 1 دسكاذ آ تا ٣ ث ٥ ت ٥ اه پ ا ٣ ػا ٥ ٥ -اػتشپت ب ٤ ؼا ٥ Penicillin( )Streptomycin- دس ؿاااشا ٤ ي ا ى ثبػااا 37 ٥ دسخ ػب ت ٣ شاد 5 دسكذ سؿذ داد ؿذ ذ. ػ ب پاغ اص زؿت 3 س ص ثب اػتفبد اص تش ٤ پؼ ٥ )Trypsin( 0/25 دسكذ 0/02 دسكاذ )Ethylenediaminetetraacetic acid( EDTA پبػبط داد ؿذ ذ. ت ب ٣ اد وت ػا اص ؿاشوت Gibco آ ش ٤ ىب خش ٤ ذاس ٢ ؿذ. مطا ذ ک رک ميه داخل سل ل با ميكريسك پ فل رسىت ثشا ٢ تی ٥٤ ذ خزة و سو ٥ دس داخ ػ ا ٣ تا ا اص خبك ٥ ت ف سػب ؼ ٣ رات ٣ ى و سو ٥ ث ػ ا ؿ بػا اػتفبد وشد. ثذ ٤ ظ س ػ ب دس پ ٥ ت وت داد ٣ ؿ ذ ػپغ ث ذت 4 ػبػت ثب غ ظت ٥ ىش الس 15 ب و سو ٥ د ااذس ص ٣ ت ٥ اابس ؿااذ ذ ػااپغ اا ٥ ي واات اااب ٢ ب و سو ٥ خبسج ؿذ ثؼذ اص ؿؼت ٢ ػ ب ثب ثابفش فؼاافبت ػااب ٥ PBS( )Phosphate Buffered Saline: ػىؼجشداس ٢ ثب ٥ ىش ػى ح آزم ن MTT ف سػ ت اص ػ ب ا دب شفت. ث ظ س ػ دؾ ٥ ضا ػ ٥ ت ٤ ه تشو ٥ ت ؿ ٥ ٥ ب ٣٤ ٤ ب اش بد د ٤ ش س ٢ ػ اص آص =3-)4 MTT 5 -د ٢ ت ٥ ا تتشاص 2-)2-٥ 5- د ٢ ف ٥ تتشاص ٥ ا ثش ب ٤ اذ( اػاتفبد ٣ ؿ د. ؼشفMTT و ٤ ه ه تتشاص ٥ صسد س اػت خزة ٥ ت و ذس ٢ ػ ب ٢ ثب تبث ٥ ه فؼب ٣ ؿ د دس اثش فؼب ٥ ات آ اض ٤ ااب ٢ د ٥ اذس ط بص ت ٥ ااذ ث ا س ف س اابص )Formazan( ثب س ث فؾ ٣ و ذ و دس ا بػت اا ٥ ضا س ت ٥ اذ ؿاذ ثاب اػاپىتش فت تش ٢ ا اذاص ٥ اش ٢ ٣ ؿ د. ثشا ٢ ش ع ػ ٣ ثب ٤ ذ ثب سػ ٣ ساث ت بػج ٣ اص تؼذاد ػ س ت ٥ ذ ؿذ سا ثا دػات آ سد. ثا ا س ختلش اذ د 8000 ػ دس ش چب ه پ ٥ ت 96 خب وت 24 ػبػت ثؼذ ثب غ ظات اب ٢ ؼ ٥ ا ٣ اص اب و سو ٥ ب اب )د ذس ص ( ت ٥ بس داد ؿذ ذ. ثؼذ اص ص ب سد ظش )24 ػبػت ت ٥ بس( ثاشا ٢ ت ٥ ابس ا ٥ ي اش چب اه ثاب 200 ٥ ىش ٥ تش ٥ ي MTT وت تبص تؼ ٤ ن ؿذ ذ پ ٥ ت ب دس ا ى ثبت س 37 دسخ ػاب ت ٣ اشاد 5 CO 2 دسكاذ ث ذت 4 ػبػت ا ى ث ؿاذ. ػاپغ ٥ ىش ٥ تاش 200 DMSO Sulfoxide( )Dimethyl ثؼذ اص تخ ٥ ا ١ MTT ثا شچب اه پ ٥ ت افض د ؿذ ص ٤ ؼت ب ب ٣٤ ؼج ٣ ػ دس ج 540 70 مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 97
ت ٥ ا شن کىترل درينزاد در مطالعات بیان mir ا تحت تیمار با ک رک میه ب تش ت ػي كف خا ا پ 96 خب ا ( plate 96well TECAN( )reader ػ ن ٥ غ( تؼ ٥٥ ؿاذ. ؼاجت خازة دس ػ ب ٢ ش ت ٥ بس ث ش و تش ٥ ضا ثمب ٢ ػ اب ٤ اب ص ٤ ؼت ب ب ٣٤ آ ب دس ش غ ظت سا ب خ ا ذ داد. غ ظت ٣ و دس آ 50 دسكذ اص ػ ب ت ػي ب و سو ٥ وت ؿذ ذ ت ت ػ ا غ ظت و ذ دس ظش شفت ؿذ. داد ب ٢ ابك اص 3 آص ب ٤ ؾ دضا ث كا ست ٥ اب ٥ ± ا اشاف اػاتب ذاسد )خه ؿذ وب سػ ة ا ٥ ت آ سا وب ؾ ٣ د ذ( دس ب ٤ ت سػ ة دس آة ت ٥ بس ؿذ ثب DEPC ا ؿذ ب دس د ب ٢ 60 دسخ ث ذت 10 دل ٥ م ا ى ث ؿذ. ثشا ٢ ب ذ بس ٢ افظ RNA ا تمب ذاس ٢ ب دس فش ٤ ضس 80- دسخ ػب ت ٣ شاد ك ست شفت. و ٥ شاا دس ص ٤ ش د ؿا ٥ ٥ ب ٣٤ ا دب شفت ث ظ س ثا ااذال سػاب ذ فؼب ٥ ات آ اض ٤ RNase و ٥ ب س ٢ ٤ خ ذاس ٢ خبث خب ٣٤ ا اد س ٢ ٤ خ ا دب ؿذ. SD( )Mean ± اسا ٤ ؿذ. ف ٥ استخراج RNA تام سل لی ٥ ض ػ ب ثب او ؾ ش Invitrogene( TRIzol آ ش ٤ ىب( ك ست شفت. شاا اػتخشاج RNA جك س ؽ وبس ؿشوت ػبص ذ ا دب ؿذ. ث س ختلش اثتذا ٥ ض وب ػا اب ثاب TRIzol دس د ب ٢ اتبق ث ذت 10-5 دل ٥ م ا دب ؿذ. ثؼاذ اص افض د ٥ ىش ٥ تش 200 و ش فش ػبص ٢ خ ى ثب ػاش ت وشد ؿذ ٤ ذ ث ذت 15 ثب ٥ ك ست شفت. ٥ ىش ت ٥ ة دس د س 12000g دس د ب ٢ 4 دسخ ػب ت ٣ شاد ػب تش ٤ ف ط ؿاذ. دس اثش ػب تش ٤ ف ط ػ ال ٤ ا ٤ دبد ٣ ؿا د. RNA دس ال ٤ ا ثابال ٣٤ پش تئ ٥ دس ال ٤ ٥ ب ٣ DNA دس ال ٤ پب ٣ ٥٤ او س داسد. ث ٥ د ٥ ثشا ٢ خ ٥ ش ٢ اص آ ا د ٣ ثاب پاش تئ ٥ DNA اذ د 90 دسكذ ال ٤ ثبال ٣٤ ث آسا ٣ ث ت ٥ ة خذ ٤ ذ تم ؿذ. ا ٤ ض پش پب )Isopropanol( ث ا ذاص ٠ اد ب ٤ غ ا تمب ٤ بفت اهبف ؿذ ث آسا ٣ خ ى ؿذ ث ذت 20 دل ٥ م دس فش ٤ ضس 20- ا ى ث ؿذ. دس د س 12000gدس د ب ٢ 4 دسخ ػب ت ٣ شاد ث ذت 15 دل ٥ م ػب تش ٤ ف ط ؿذ. ال ٤ س ٣٤ تخ ١٥ ٥ ٣ ٥ تش 1 اتب 75 دسكذ )ت ٥ ؿذ ثاب آة ت ٥ ابس ؿاذ ثاب )Diethylpyrocarbonate( DEPC افاض د ؿااذ ستىااغ )Vortex( خ اا ى تااب و ااذ ؿااذ سػاا ة تاا ٥ ىش ت ٥ ة ا دب ؿذ. دس د س 7800g دسد ب ٢ 4 دسخ ػب ت ٣ شاد ث ذت 8 دل ٥ م ػب تش ٤ ف ط س ٣٤ ثب اس وشد ت ٥ ة س ٢ دػت ب وبغز ٢ تخ ٥ ؿذ. ػاپغ سػا ة ث س ؼج ٣ دس د ب ٢ اتبق ث ذت چ اذ دل ٥ ما خاه ؿاذ. بررسی کم ی ي کيفی RNA استخراج ضذ پغ اص اػتخشاج RNA و ٥ ت و ٥ ف ٥ ت آ ثاب س ؽ اب ٢ ػ د ٣ س ٢ ا ىتش ف سص ط آ بسص ثشسػ ٣ ؿذ. ثشسػ ٣ غ ظت RNA ثب س ؽ اػپىتش فت تش ٢ ٤ ه س ؽ و ی ٣ اػت ٣ ت ا غ ظت خ ف RNA آ د ٣ آ ثب پش تئ ٥ تشو ٥ جبت ف ا ٣ سا ثاب اػاتفبد اص خازة ا س ٢ دس ا ج ب 260٢ )ثشا ٢ خزة اػ ٥ ذ و ئ ٥ ه( 280 )ثشا ٢ خزة پش تئ ٥ ( 230 )ثشا ٢ خزة ف ( ب تش ثشسػ ٣ وشد. ٣٤RNA و اص ظش ؿ ٥ ٥ ب ٣٤ دػت خ سد ثبؿذ اص ظش ص ٤ ؼت ٣ و ٥ ف ٥ ت اػتب ذاسد داؿت ثبؿذ ا ٢ ثب ذ ٤ ظ ا ٢ س ٢ ط آ بسص ب ٣ د ذ. او س ثب ذ ب ٢ RNA س ٤ جا ص ٣ 28s 18s ب د ذ ٠ ػب دػت خ سد ث د RNA اػت. ب ٣٤ ثب و ٥ ف ٥ ت ػب ٣ اذال اػ ٥ ش )Smear( سا دس ثبال ث ٥ پب ٥٤ ثب ذ ب ٢ زو س ب ٣ د ذ ؿذت ثب ذ 28s تمش ٤ جب د ثشاثش ثب ذ 18s اػت. فمذا ثب ذ ب ٢ اه 18s س ٤ ج ص ٣ RNA 28s ب د ذ ٠ تدض ١٤ RNA ت ػي آ ض ٤ RNase اػت ث خل ف ا ش اب ت اػ ٥ ش ذ د ث ثخؾ ت تب ٣ ط ثبؿذ. ياکىص ريو یسی معك س برای ساخت cdna برای شن ای microrna ثشا ٢ تجذ ٤ RNA ث )Complementary DNA( cdna ٥ بص ث آغبص ش )Primer( ثشا ٢ خفت ؿذ ثاب RNA اػات 71 Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), N0. 1 97
میىا زماوی ي مکاران ت ػي آ ض ٤ س ؿت ثشداس ؼى ع Transcriptase( )Reverse ا ٤ دبد شدد. آغبص ش ٢ وا ثاشا ٢ ػا تض ا ا ٥ سؿات cdna اػتفبد ٣ ؿ د ٣ ت ا ذ ث س اختلبك ٣ ث سد ذف تل ؿ د ٤ ب ث RNA ب تل ؿ د. RNA اػتخشاج ؿاذ ثاب اػتفبد اص TRIzol ث ػ ت اات ب آ ا د ٣ ثاب DNA ا ت اات ت ٥ اابس ثااب Thermo Fisher Scientific( DNaseI آ ش ٤ ىب( لشاس شفت. ثشا ٢ ػبخت cdna دس ا ٤ ا ت م ٥ اك اص و ٥ ت اػتفبد ؿذ. ثب ٤ ذ ت خ ؿ د و و ٥ شاا ثب ٤ ذ ثب ػب ٤ ب ٢ ػبس ٢ اص RNase ا داب ؿا د. ثاشا ٢ ػابخت cdna اص و ٥ ات PARSGENOME MiR-Amp kit اػاتفبد ؿذ. تىث ٥ ش microrna ث و ه ٤ ى ٣ Real-time PCR اص پاش وبسثشدتش ٤ س ؽ ب دس ا ص ت م ٥ مابت ٣ microrna اػات. اػبع ا ٤ س ؽ بث س ؽ اب ٢ ؼ ا ٣ Real-time PCR اػاات ثااب ا ٤ اا تفااب ت واا ثاا اػاا واا چى ٣ ا ااذاص microrna ب سا وبس ب ٢ خبك ٣ ثشا ٢ ا ٤ ظ س اسا ٤ ؿاذ اػت. افض د ٤ ه د polya ث mir ب ٢ سد ظاش ٤ ىا ٣ اص ا ٤ ؿ ٥ بػت و دس و ٥ ات PARS GENOME MiR-Amp kit )ا ٤ شا ( ٥ ض اص ٥ س ؽ ثشا ٢ تىث ٥ ش mir ب اػتفبد ؿاذ اػت. شا افض د پ ٣ A ؿب : ثبفشآ ض ٤ پ ا ٣ A پ ٥ اشاص A ٥ ىش ٥ تااش( آ ااض ٤ پ اا ٣ 2( ATP 2( ٥ ىش ٥ تااش( 10X پ ٥ شاص )2-1/5 RNA ٥ ىش ش ( دس ب ٤ ات سػاب ذ ثا اد و ٣ ٥ ىش ٥ تش 20 ت ػي آة ػابس ٢ اص RNase اػات. ت ب ٣ اد ف ق ثب و ه پ ٥ پت وشد ث آسا ٣ ثب ٤ ىذ ٤ ش خ ى ثؼذ اص چشخب ذ ت ات تشو ٥ جابت دس د اب ٢ 37 دسخا 5x ػب ت ٣ شاد ث ذت 10 دل ٥ م ا ى ث ٣ ؿ د. ل ف ق لبث ذاس ٢ دس فش ٤ ضس 80- دسخ ػب ت ٣ شاد ث ذت اذاوثش 6 ب اػت. شا ١ ػبخت سؿت ا cdna ؿب : ت ٥ ثبفش او ؾ )2 ٥ ىش ٥ تش( خ ى )10 dntp ٣ ٥ الس ٥ ىش ٥ تش( 1 آ ااض ٤ )0/5 RT ٥ ىش ٥ تااش( آغبص ش ااب ٢ ػاا تض )10 mir پ ٥ ى الس شوذا ٥ ىش ٥ تش( 1 RNA اب ٢ پ ٣ A اص شا لج )500 ب ش ( دس ب ٤ ت سػب ذ ثا ادا و ا ٣ 10 ٥ ىش ٥ تش ت ػي آة ػبس ٢ اص RNase ث د. و ت ب ٣ اد ف ق ثب و ه پ ٥ پت وشد ث آسا ٣ ثب ٤ ىذ ٤ ش خ ى ؿذ دس ب ٤ ت اػپ ٥ ؿذ دس د ب ٢ 45-43 دسخ ػب ت ٣ شاد ث اذت 60 دل ٥ م ا ى ث ؿذ ػپغ ثشا ٢ غ ٥ شفؼب ػبص ٢ آ ض ٤ RT ث ذت 10 دل ٥ م ا ى ثبػ ٥ دس د ب ٢ 70 دسخ ػب ت ٣ شاد الص اػت. ل ف ق دس فش ٤ ضس 20- دسخ ػب ت ٣ شاد ث ذت اذاوثش 2 ب لبث ذاس ٢ اػت. Reverse Transcription ( ياکىص RT-PCR )PCR پغ اص ػا تض cdna اص اوا ؾ Real time RT-PCR ػ ٥ ؼت )ROX( Eva green ثشا ٢ ػا دؾ و ا ٣ ث ٥ اب ط اب اػاتفبد ؿاذ. ا اد ا سد اػاتفبد ؿااب خ ا ى HOT Solis ( 5X FIREPOL EvaGreen qpcr plus ROX Bio Dyne اػت ٣ ( آغبص ش ب ٢ ؼتم ٥ ؼىا ع ثاشا ٢ ش د mir-16 U6 ث د و اص ؿشوت پبسع ط ت ٥ ؿاذ. Real Time ػا تض ؿاذ ( دػات ب cdna( ا ا DNA Real time RT-PCR ثااشا ٢ اواا ؾ )ABI 7500( PCR اػتفبد ؿذ. ثش ب د ب ٣٤ ص ب ٣ بثك خذ 1 اخشا ؿذ. جذيل 1 ؿشا ٤ ي د ب ٣٤ ص ب ٣ دس ػ دؾPCR Real-time Quantitative شا اػشؿت ٣ ا ٥ اػشؿت ٣ اتلب ؼتشؽ ؼتشؽ ب ٣٤ چشخ 1 د ب )دسخ ػب ت ٣ شاد( 95 ص ب 15 دل ٥ م 95 60 40 15 ثب ٥ 20 ثب ٥ 30 ثب ٥ 5 دل ٥ م 72 72 1 تجسی ي تحليل آماری تدض ٤ ت ٥ داد ب ثب اػتفبد اص ش افاضاس GraphPad Prism5 تدض ٤ ت ٥ آ بس ٢ ثاب اػاتفبد اص س ؽ آ اب ٥ ض اس ٤ ب غ ٤ اه شفا ( Varience: One Way Analysis of )ANOVA آص ت ٣ ب ٢ ؼتم Unpaired( )T-test 72 مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 97
ه ٤ ا شن کىترل درينزاد در مطالعات بیان mir ا تحت تیمار با ک رک میه ث ٥ ب ٢ و تش ت ٥ بس ا دب ؿذ. وتایج مطا ذ ک رک ميه داخل سل ل با ميكريسك پ فل رسىت ث ظ س تی ٥٤ ذ خزة و سو ٥ داخ ػ س د آ ت ػي ٥ ىش ػى ح ف سػب غ ث د ٥ خبكا ٥ ت ف سػاب غ راتا ٣ و سو ٥ ثشسػ ٣ ؿذ. ػ ب ٢ ػش ب ٣ ثب غ ظت ٥ ىش الس 14 ث ذت 3 ػبػت ت ٥ بس ؿذ ذ ػپغ اص آ ب ػىؼجشداس ٢ ؿذ. بررسی غلظت مىاسب تيمار سل ل ای سرطاوی با واو ک رک ميه )ک رک ميه دوذريزيمی( آص MTT ا دب ؿذ داس ابك اص آ دس ؿى 2 لبث ب ذ اػت. تدض ٤ ت ٥ داد ب ثاب ANOVA شف اثش ؼ ٣ داس ػ ٥ ت ب و سو ٥ )0/0001>P( ػاذ ػ ٥ ت د ذس ص س ٢ ا ٤ سد ب ٢ ػ ٣ دس ت ٥ بس 24 ػبػت دس ثبص ٠ غ ظت 0 تب ٥ ىش الس 30 س ٢ ش د سد ٠ ػ ٣ سا ب داد. ماذاس IC 50 ثاشا ٢ اب و سو ٥ دس ػا اب ٢ ػش ب ٣ پبت ب اذ د ٥ ىش الس 24 ث دػت آ ذ. ػپغ ثشا ٢ ت ٥ بس غ ظت ٣ ؼبد IC 50 اػتفبد ؿذ. ضكل 1 ب ذ خزة ػ ٣ و سو ٥ ثب ٥ ىش ػى ح تلب ٤ ش اص د سد ٠ ػ ٣ پبت ب )ا ف( )1( تل ٤ ش و تش )2( تل ٤ ش ٥ ىش ػى ح س ٢ اص ػ ب ٢ HepG2 )3( تل ٤ ش ٥ ىش ػى ح فشاث فؾ اص ػ ب ٢ HepG2 )ة( )1( تل ٤ ش و تش )2( تل ٤ ش ٥ ىش ػى ح س ٢ اص ػ ب ٢ HuH-7 )3( تل ٤ ش ٥ ىش ػى ح فشاث فؾ اص ػ ب ٢ HuH-7 اػت. تلب ٤ ش ب ش س د و سو ٥ ث ػ بػت مذاس و ٣ اص آ ث ك ست وش ٤ ؼتب ث ٥ ػ ب ب ذ ٣ ؿ د. )ثضس ب ٣٤ 100( ضكل 2 ثشسػ ٣ اثش ػ ٥ ت ب و سو ٥ د ذس ص )ا ف( سد ٠ ػ ٣ HepG2 )ة( سد ػ ٣ HuH-7 دس ا ٤ ا ثابص ٠ غ ظات اب وش و ٥ ثا ا س ؼ ا ٣ داس ٢ : 0/05>P : ( ػ ب ٢ ػش ب ٣ پبت ب سا وب ؾ ٣ د ذ ٣ د ذس ص اثش ػا ٥ ت ؼ ا ٣ داس ٢ س ٢ ػا اب اذاسد. )Viability( ص ٤ ؼت ب ب ٣٤ )0/0001>P( )P<0/0001 : P<0/001 : P<0/01 73 Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), N0. 1 97
میىا زماوی ي مکاران استخراج RNA از سل ل اای تيمارضاذ باا واو ک رک ميه ي سل ل ای کىترل برای بررسی بيان شن ا ػ اب دس پ ٥ ات اب ٢ 6 خب ا ثاب غ ظات بػاج ٣ اص ب و سو ٥ ت ٥ بس ؿذ ذ ثؼذ اص ص ب سد ظش ثب اػتفبد اص تش ٤ ض RNA اص ػ ب ٢ و تش ت ٥ بس اػتخشاج ؿذ. ثشا ٢ ثشسػ ٣ دسػت ٣ RNA اػتخشاج ؿذ خ د ثب ذ ب ٢ 18s 28s 5s س ٢ ط آ بسص ثشسػ ٣ ؿاذ وا اب د اذ دسػات ٣ RNA ب ٢ اػتخشاج ؿذ ثا د اش ا ت ػاي دػات ب اػپىتش فت تش دس ا ج اب ٢ 230 280 260 اب تش ا ذاص ٥ ش ٢ ؿذ ؼجت ب ٢ 260/230 260/280 ث ٥ 2-1/8 ث د و ب د ذ ٠ ػذ آ د ٣ ب ٢ پاش تئ ٥ ف ا اػات چ ٥ خزة دس ج 260 ب تش ب د ذ ٠ غ ظت RNA سد ظش اػت. ث بثشا ٤ تب ٤ ح ث دػت آ ذ ب د ذ آ ث د و ٢RNA اػتخشاج ؿذ ٣ ت ا ذ ثب ا ٥ اب ثابال دس شاا ثؼذ ٢ ت م ٥ ك اػتفبد ؿ د. تجسی ي تحليل بيان ي hsa-mir-16 snrna- U6 در سل ل ای تيمار ضذ با واو ک رک ميه ي سل ل ای کىترل چشخ اذ آػتب ١ ث ٥ ب ط ب ٢ mir-16 U6 دس اش د سد ٠ ػ ٣ دس ب ٢ و تش ت ٥ بس ثب اب و سو ٥ دس خذا 3 2 خق ؿذ اػت. ٥ ب ٥ ثا اشا ا اشاف ؼ ٥ بس ثشا ٢ ت ب اسد چشخ ب ٢ اذ آػتب ١ ط ب دس ب ٢ و تش ت ٥ بس ثب ب و سو ٥ دس تىشاس ب ٢ تى ٥ ى ٣ ص ٤ ؼت ٣ دس خذ 4 لبث ب ذ اػت. تب ٤ ح ب ٣ د ذ تغ ٥٥ شات U6 دس سد ٠ ػاا ٣ HuH-7 mir-16 دس سد ٠ ػاا ٣ HepG2 تغ ٥٥ شات و تش پب ٤ ذاس ٢ ث ٥ تش ٢ داسد. ا جت دس ش د سد ٠ ػ ٣ U6 ث ٥ ب ثبالتش ٢ ؼجت ث mir-16 داسد و ا ٤ اخت ف ث ٥ ب دس سد ٠ ػ ٣ HuH-7 ؼ عتشاػت. جذيل 2 چشخ اذ آػتب ١ دس سد ٠ ػ ٣ HuH-7 mir-16 ث ٥ ب ط ب ٢ U6 )Cycle threshold: Ct( * * تكرار تكىيكی تكرار زیستی Ct Ct شن وم و تىشاس ص ٤ ؼت ٣ تىشاس تى ٥ ى ٣ 19/9932 و تش MiR-16 16/39065 19/5618 ت ٥ بس MiR-16 16/53391 تىشاس تى ٥ ى ٣ 18/1833 و تش MiR-16 18/67241 18/5090 ت ٥ بس MiR-16 19/32912 تىشاس ص ٤ ؼت ٣ تىشاس تى ٥ ى ٣ 14/5011 14/8004 و تش U6 15/0593 14/9121 ت ٥ بس U6 تىشاس تى ٥ ى ٣ 14/8665 14/2747 و تش U6 15/4603 14/7103 ت ٥ بس U6 تىشاس تى ٥ ى ٣ : ظ س اص ا ٤ تىشاس تىشاس شاا تى ٥ ى ٣ آص ب ٤ ؾ اػت ابك Real time PCR ت ب ٤ ض اص ب ٢ ٤ ىؼب اػت. تىشاس ص ٤ ؼت ٣ : ظ س اص ا ٤ تىشاس تىشاس شاا ت ٥ بس ػ ٣ ب ٢ خت ف ثشا ٢ Real time PCR اػت. جذيل 3 چشخ اذ آػتب ١ ث ٥ ب ط ب ٢ mir-16 U6 دس سد ٠ ػ ٣ HepG2 74 97 * * تكرار تكىيكی تكرار زیستی Ct Ct شن وم و تىشاس ص ٤ ؼت ٣ تىشاس تى ٥ ى ٣ 18/7319 و تش MiR-16 19/0708 18/8995 ت ٥ بس MiR-16 18/6603 تىشاس تى ٥ ى ٣ 18/6931 و تش MiR-16 18/8670 18/8860 ت ٥ بس MiR-16 18/8624 تىشاس ص ٤ ؼت ٣ تىشاس تى ٥ ى ٣ 15/8867 16/9190 و تش U6 15/7729 17/9603 ت ٥ بس U6 تىشاس تى ٥ ى ٣ 16/2216 17/4028 و تش U6 16/2220 18/7785 ت ٥ بس U6 تىشاس تى ٥ ى ٣ : ظ س اص ا ٤ تىشاس تىشاس شاا تى ٥ ى ٣ آص ب ٤ ؾ اػت ابك Real time PCR ت ب ٤ ض اص ب ٢ ٤ ىؼب اػت. تىشاس ص ٤ ؼت ٣ : ظ س اص ا ٤ تىشاس تىشاس شاا ت ٥ بس ػ ٣ ب ٢ خت ف ثشا ٢ Real time PCR اػت. مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314
جذيل ٥ ب ٥ 4 اس ٤ ب غ تغ ٥٥ شات ث ٥ ب ط ب ٢ mir-16 U6 شن کىترل درينزاد در مطالعات بیان mir ا تحت تیمار با ک رک میه MiR-16 & U6 16/46028 ± 0/764325 16/75948 ± 0/733172 17/71729 ± 0/344185 17/97338 ± 0/652344 MiR-16 18/30989 ± 1/290781 18/48346 ± 1/19157 0/09718 ± 18/82705 0/074735 ± 18/764 U6 14/61068 ± 0/23787 15/03555 ±0/274774 0/591186 ± 16/60753 17/18275 ± 0/230153 ردة سل لی و تش (HuH-7) ت ٥ بس (HuH-7) و تش (HepG2) ت ٥ بس (HepG2) ضكل 3 ٣ تىث ٥ ش ط ب ٢ ػ ٣ HuH-7 )ج( ث ٥ ب ش ٣ ب ٢ تىث ٥ ش ط U6 )د( ث ٥ ب ش ٣ ب ٢ تىث ٥ ش ط mir-16 U6 دس سد ب ٢ ػ ٣ پبت ب )ا ف( ث ٥ ب ش ٣ ب ٢ تىث ٥ ش ط mir-16 )ة( ث ٥ ب ش ٣ ب ٢ تىث ٥ اش ط U6 دس سد ٠ mir-16 دس سد ٠ ػ ٣ HepG2 اػت. 75 Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), N0. 1 97
میىا زماوی ي مکاران اػت دس الغ ٣ ت ا فات وا U6 دس ؿاشا ٤ ي ت ٥ ابس ثاب ااب و سو ٥ دس ػاا ااب ٢ HuH-7 پب ٤ ااذاستش اػاات ٣ ت ا ذ ث ػ ا ا ٤ اه و تاش دس صاد بػات دس د ػا آص اا ااشتجي ثاا واابس س د چ اا ٥ mir-16 دس ؿااشا ٤ ي ت ٥ ابس ثاب اب و سو ٥ دس ػا اب ٢ HepG2 پب ٤ ااذاستش اػت ٣ ت ا اذ ثا ػ ا ا ٤ اه و تاش دس صاد بػات دس د ػ آص شتجي ث وبس س د. ث ٥ ااب ط ااب ٢ mir-16 snrna-u6 دس اا ااب ٢ ت ٥ بس و تش ب س و دس ؿاى 5 ا اخق ؿاذ اػت تفب ت ؼ ا ٣ داس ٢ ذاس اذ دس ا ١ ا اسد 0/05>P اػت. ا جتا ثاب ت خا ثا ا ٣ اب ٢ تىث ٥ اش دس ؿاى 4 داس ؿاى 6 ا ٣ ث ٥ ا ٥ دا ا ١ تغ ٥٥ اشات ثاشا ٢ U6 دس ثا ٥ اب ٢ و تاش ت ٥ ابس HuH-7 دا ا ١ تغ ٥٥ اشات ثاشا ٢ mir-16 دس ثا ٥ ا اب ٢ و تاش ت ٥ ابس HepG2 و تاش ضكل 4 تدض ٤ ت ٥ ث ٥ ب ط بU6٢ mir-16 دس سد ب ٢ ػ ٣ پبت ب ثب داس ػت ٣ دس تلب ٤ ش )ا ف( ث ٥ ب U6 )ة( ث ٥ ب mir-16 دس HepG2 )ج( ث ٥ بU6 )د( ث ٥ ب mir-16 دس.HuH-7 ث س تشو ٥ ج ٣ ٥ ب ٣ ٥ اص ث ٥ بU6 mir-16 دس سد ٠ ػ ٣ ) ( HepG2 HuH-7)٢( لبث ب ذ اػت. دس داس ب ٢ ث ٥ ب ط ب ٢ mir-16 U6 ث ٥ ب ٢ و تش ت ٥ بس ؿذ ثب ب و سو ٥ ثب ت خ ث ٥ ب ٥ ا شاف ؼ ٥ بس SD( )Mean ± لبث ب ذ اػت 98 ضكل 5 تدض ٤ ت ٥ ث ٥ ب ط ب ٢ mir-16 U6 دس سد ب ٢ ػ ٣ پبت ب ثب داس خؼج ا ٢ دس تلب ٤ ش )ا ف(دس HepG2 ب ؿب 1: ث ٥ اب U6 دس ا ١ و تش 2: ث ٥ ب U6 دس ١ ت ٥ بس 3: ث ٥ ب mir-16 دس ١ و تش 4: ث ٥ ب mir-16 دس ١ ت ٥ بس ٥ ب ٥ 5: ث ٥ ب mir-16 U6 دس ١ و تش ٥ ب ٥ 6: ث ٥ ب mir-16 U6 دس ١ ت ٥ بس. )ة( دس HuH-7 ب ؿب 1: ث ٥ ب U6 دس ١ و تش 2: ث ٥ ب U6 دس ١ ت ٥ بس 3: ث ٥ ب mir-16 دس ١ و تاش 4: ث ٥ اب mir-16 دس ١ ت ٥ بس ٥ ب ٥ :5 ث ٥ ب mir-16 U6 دس ١ و تش ٥ ب ٥ :6 ث ٥ ب mir-16 U6 دس ١ ت ٥ بس. ث ٥ ب ط ب ٢ mir-16 U6 ث ٥ ب ٢ و تش ت ٥ بس ؿذ ثب ب و سو ٥ ثب ت خ ث اذال اذاوثش تغ ٥٥ شات Max( )Min to لبث ب ذ اػت. مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 76
شن کىترل درينزاد در مطالعات بیان mir ا تحت تیمار با ک رک میه ؿى 6 داس ابك اص تدض ٤ ت ٥ داد ب دس ش افضاس BestKeeper )ا ف( سد ػ ٣ HepG2 )ة( سد ػ ٣ HuH-7 داد ب ٢ Real time PCR ث ك ست Excel تدض ٤ ا ت ٥ ا داد ااب ٢ ااش د ط mir-16 snrna-u6 چ اا ٥ Ct ب ٢ ٥ ب ٥ د ط ت ػي ا ٤ ش افضاس ب ا دب ؿذ. تاب ٤ ح ثشسػ ٣ ت ػي ش افضاس NormFinder ب د ذ ا تخابة ط )0/035 ; Stability Value پب ٤ ااذاس ٢ ٤ ااب )اسصؽ mir-16 ثاشا ٢ سد ػا ٣ HepG2 اػاتفبد تشو ٥ جا ٣ اص اش د ط mir-16 snrna-u6 ثشا ٢ سد ػ ٣ HuH-7 )ثاب اسصؽ اػتفبد ٠ تشو ٥ ج ٣ اص ش د ط ٣ ت ا ذ ث ػ ا ا و تاش دس صاد ا ػبت دل ٥ كتش دس ب ؼ ١ ثشسػ ٣ ث ٥ ب ط ب ٢ mir ث ك ست تشن مب ٤ ؼ ا ٢ دس ش د سد ٠ ػ ٣ اسا ٤ د ذ. ا ٤ ع ث وبس ٥ ش ٢ تشو ٥ ج ٣ ط ب ٢ و تش دس صاد خ ب ٢ ا ٤ دبد ؿذ دس وبسثشد دضا ٢ شوذا سا وب ؾ ٣ د ذ. ب س و دس داس ؿى 6 لبث ب ذ اػات دا ا ١ تغ ٥٥ اشات U6 دس HepG2 دا ١ تغ ٥٥ شات mir-16 دس HuH-7 ثب ثا وابس ٥ ش ٢ ; )0/009 ث د. تشو ٥ ت ا ٤ د ط دس اش د سد ٠ ػا ٣ ؼاجت ثا وابسثشد پب ٤ ذاس ٢ ٤ ب Stability Value دضا ٢ آ ب وب ؾ ٤ بفت اػت. تجسی ي تحليل بيان ي mir-16 در snrna-u6 سل ل ای تيمارضذ با واو ک رک ميه ي سل ل ای کىترل ت سا وارمافسار اای ي BestKeeper.NormFinder اص ش افضاس ب ٢ ا تخبة ط ب ٢ و تاش دس صاد ثشاػابع پب ٤ ذاس ٢ ث ٥ ب آ ب ث ٥ ب ٢ سد آص ب ٤ ؾ ا ٣ تا ا ثا ش افضاس ب ٢ NormFinder BestKeeper اؿبس وشد و دس ب ؼبت فشا ا ٣ ثشا ٢ ا تخبة ط و تش داخ ٣ بػت اص ٥ ب وب ذ ٤ ذ ب ٢ سد ثشسػ ٣ اػتفبد ؿذ اػات. پاغ اص كاذ س تب ٤ ح ثشسػ ٣ داد ب ت ػي ش افضاس BestKeeper ب ش ا تخبة ط mir-16 ) P;0/021 (ثشا ٢ سد ػا ٣ HepG2 تشو ٥ ج ٣ اص ش د ط ثشا ٢ سد ػ ٣ HuH-7 )0/01;P( ث د. تغييرات بيان mir-29a mir-16 U6 تغ ٥٥ شات ث ٥ ب ي ترکيبی از آن ا وسبت ب بياان شن اای ؼجت ث ث ٥ اب ط اب ٢ mir- U6 mir-29a 16 تشو ٥ ج ٣ اص آ ب ب د ذ افضا ٤ ؾ ؼ ا ٣ داس ث ٥ اب ا ٤ ا mir ثااب ػ ىشد ااب ٢ بسو ااذ ٣ ت اا س دس سد ػاا ٣ واب ؾ غ ٥ اش ؼ ا ٣ داس آ دس سد ػا ٣ HepG2 HuH-7 ث د )خذ 5(. خذ 5 تغ ٥٥ شات ث ٥ ب mir-29a ؼجت ث ث ٥ ب ط ب ٢ mir-16 U6 تشو ٥ ج ٣ اص آ ب ردة سل لی ي U6 وسبت ب مياوگيه mir-16 mir-29a وسبت ب mir-16 mir-29a وسبت ب U6 mir-29a 2/5962±0/674 2/4046±0/7126 2/9442±1/2574 HuH-7 0/5843±0/4453 0/4656±0/0337 0/1036±0/4433 HepG2 77 Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), N0. 1 99
میىا زماوی ي مکاران بحث 9: مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 78 ب ؼبت ثشسػ ٣ ث ٥ ب mir ثب اػتفبد اص time ( RQ-PCR )Real-quantitative PCR ثب ٤ ذ ثب ا تخابة دل ٥ اك ط و تاش دس صاد بػت ثشا ٢ اػاتب ذاسدػابص ٢ داد اب ا داب ؿا د. اػاتب ذاسدػابص ٢ ثاشا ٢ ا ٥ اب اص و یا ٣ ػابص ٢ دل ٥ اك ا ٤ ا ى ب ٢ خزاة و چه ص ٤ ؼت ٣ ك ست ٥ ٣ اشد. اذف اػتب ذاسدػبص ٢ ث اذال سػب ذ اس ٤ ب غ داد بػت و ثشا ٢ ب ٤ ب وشد تغ ٥٥ شات ص ٤ ؼت ٣ ؼ ٣ داس دس و ابس افاضا ٤ ؾ دلات ا ذاص ٥ ش ٢ ث ٥ ب ط ب اػت. اػتفبد اص ثشخ ٣ ط اب ٢ و تاش داخ اا ٣ ثؼاا ٥ بس شػاا اػاات مماا ٥ اص آ ااب ثااشا ٢ اػتب ذاسدػبص ٢ داد ب ٢ ث ٥ ب ط اػتفبد ٣ و ذ. دس اب ٣ وا ثب ت خ ث ا ٤ ىت و ات ٣ ط ب ٢ شػ ب ذ ٤ ب GAPDH β-actin دس ب ٢ خت ف تب 10 ثشاثش ٤ ب ث ٥ تش اخت ف ث ٥ ب داس ذ =19 20> ثشا ٢ ش ب ؼ ث ٥ ٤ ه تب ػ ط ثشا ٢ و تش داخ ٣ ثشا ٢ ش ١ سد آص ب ٤ ؾ ثب ٤ اذ اسص ٤ ابث ٣ ؿا د. دس ب ؼبت تؼذد ٢ snrna ب snorna اب خا د mir اب ث ػ ا ط و تش دس صاد دس ب ؼبت ث ٥ ب ٣ mir ب اػاتفبد ٣ ؿ د. ا ٤ ب ؼبت تاب ثا ا اش ص ؿاب ٤ اب 18S 5S U6 mir-16 ٤ ب LET-7A اػت =33-31>. اخات ف ص ٤ ابد دس ث ٥ اب ط ب ٢ سد ظش ث ٥ ب ٢ سد آص ب ٤ ؾ ٣ ت ا ذ ؼجت ث اػتب ذاسدػبص ٢ هؼ ٥ ف ػبص بس ثبؿذ دس ت ٥ د ١ و ٣ خ ؼ ٣ داس ٢ اسد ؼبصد ا ب دس سد اخت فبت و ا ٤ ا ؼائ ث س ٤ م ٥ ثؼ ٥ بس ؤثش ؼ ٣ داس خ ا ذ ثا د س ٢ ت ٥ دا ١ و ٣ ٣ ت ا ذ تیث ٥ ش ؼى ع ب د ذ. ثب ت خ ث ب ؼ ١ وب ٥ )Calin( و سن )Corce( ت ا ب ٣٤ mir ب دس ت ظ ٥ ا اذاف تؼذد دس ؼ ٥ ش ٤ ىؼب تایث ٥ ش ص ٤ ؼات ٣ آ اب سا چ اذ ٤ ثشاثاش تذ ٤ ذ ٣ و ذ =35>. دس ت ٥ د تغ ٥٥ شات ؼاج ٣ خض ٤ ا ٣ mir اب ا ٥ ت فشا ا ٣ خ ا ذ داؿت. ث ابثشا ٤ اػاتب ذاسدػابص ٢ ث ٥ اب آ ب ثب و تش ب ٢ دس صاد بػت داسا ٢ ا ٥ ت اػات. ٤ اه و تش دس صاد ثشا ٢ ثشخا ٣ آص اب ٤ ؾ اب بػات اػات ا ٣ اػتفبد ث ٥ ؾ اص ٤ ه و تش داخ ٣ ثشا ٢ ػ دؾ ا ػبت شچ دل ٥ كتش تغ ٥٥ شات ث ٥ ب ف ٥ ذ خ ا ذ ث د. ب ؼ ١ ٥ ذ ٢ )Heidi( ىبسا ب داد اػتفبد اص خ د ط ب ٢ mir ؿاب mir- mir-103 191 mir-17-5p دس ثشسػاااا ٣ ث ٥ ااااب mir دس ثشخ ٣ ثبفت ب ٢ ػش ب ٣ ج ٥ ؼ ٣ ثشا ٢ و تش دس صاد بػت اػت ات ٣ ؼجت ث ط ب ٣٤ ب ذ 5S U6 ؿشا ٤ ي ث تاش ٢ دس ا ٤ اب داس اذ =36>. دس ب ؼا ١ پاب )Pamela( ىاابسا ط ااب ٣٤ اص mir-10b mir-21 mir-16( mir RNU48 RNU19( snrna )let-7 mir-26b Z30( ثشا ٢ و تش دس صاد دس ا اب ٢ ج ٥ ؼا ٣ ت ا س خ ؽخ ٥ ثذخ ٥ ػش ب پؼتب ثشسػ ٣ ؿذ =37>. تب ٤ ح آ ب ااب داد mir-16 Let-7 اص پب ٤ ااذاس ٢ ث ٥ ااتش ٢ دس ثاا ٥ ا اب ثشخ سداسػات. دس ب ؼاا ا ٢ ا اهدس اا ت ىاابسا اػااتفبد ٠ تشو ٥ جاا ٣ اص mir-16 )McDermott( mir-425 ثشا ٢ اػتب ذاسدػابص ٢ داد اب سا پ ٥ ا بد وشد اذ اسص ٤ ابث ٣ آ اب ا ٤ ا تشو ٥ ات سا ث تاش اص اػاتفبد ٠ ثا ت اب ٣٤ اص ٤ ب snrna-u6 mir دس ب ٢ خا ثبفات ت ا س پؼاتب اب داد =38>. ثاب خا د ماؾ بسو اذ ٣ سؿاذ ػ ب ٢ ػش ب ٣ وجذ ثب افضا ٤ ؾ ث ٥ ب mir-16 ا ٤ ط ت ت ت ٥ بس ثب ب و سو ٥ دس سد ب ٢ ػ ٣ ػش ب ٣ وجذ دس ا ٤ ب ؼ تغ ٥٥ ش ث ٥ ب ؼ ٣ داس ٢ ذاؿت. لبث ت خ اػت وا ا ٤ ا ط دس ػ ب ٢ HepG2 ث ٥ ب پب ٤ ذاس ثب ثجبت ث ٥ تش ٢ ؼجت ث U6 ت ت ت ٥ بس ثب ب و سو ٥ داؿت. ا ٤ ؼئ ٣ ت ا ذ ث د ٥ چ ذ ذف ٣ ث د و سو ٥ دس ذف ٥ ش ٢ ى ب ٢ تؼذد دس ؼ ٥ ش مبث ثب ػش ب ثبؿاذ ا ٤ ا ط سا ثا ػ ا ا و تش دس صاد بػات دس د ػا ا سد آص اب ٤ ؾ دس سد ػ ٣ HepG2 دس ؼشم ت خ لشاس د ذ. ثا اش ااب دس استجبى ثب ثشسػ ٣ ط ب ٢ و تش دس صاد ت ت ت ٥ ابس داس ٤ ا ٣ ب ؼبت ص ٤ بد ٢ دس دػتشع ٥ ؼت دس اغ ت پاظ ؾ اب ٢ شثا ى ثا ا ٤ ا ها ع ط اب ٢ شػا ثاذ اسص ٤ ابث ٣ ٤ ظ ا ٣ اب ٢ و تاش دس صاد ثا ػ ا ا ط شخاغ اػاتفبد ؿذ اػت. دس ب ؼ ١ ابهش mir-16 snrna-u6 ث ٥ ب ثابال تغ ٥٥ شات غ ٥ ش ؼ ٣ داس ٢ )0/1>P( سا دس ا ٤ ا د سد ٠ ػا ٣ ت ت ت ٥ بس ثب ب و سو ٥ ب داد. ا جتا مماب ابهاش
شن کىترل درينزاد در مطالعات بیان mir ا تحت تیمار با ک رک میه پ ٥ بد ٣ و اذ اػاتفبد ٠ تشو ٥ جا ٣ اص ا ٤ ا د ط ثاشا ٢ و تاش دس صاد ثشا ٢ تدض ٤ ت ٥ ث ٥ ب mir دس سد اب ٢ ػا ٣ ػش ب ٣ وجذ ت ت ت ٥ بس ثب ب و سو ٥ ٣ ت ا ذ ا تخبة بػج ٣ ثبؿذ. دس ثشسػ ٣ دل ٥ كتش ثاب ت خا ثا دا ا ١ تغ ٥٥ اشات چشخ ا ٢ ث ٥ ب ٣ ش د ٢ ا ٤ ط ب دس ؿشا ٤ ي ت ٥ بس ثاب تشو ٥ ات داس ٣٤ سد ظش ثشسػ ٣ ابهش ب و سو ٥ ثشسػ ٣ ب ٢ تغ ٥٥ ااشات چشخاا ااب دس ااش افضاس اااب ٢ Bestkeeper Normfinder داش ثا ت ٥ دا ٥ اش ٢ دل ٥ اكتاش ا تخاابة بػتتش ٢ دس ا ٤ ص ٥ ؿذ و ث س وا ا ٣ تا ا فات ٤ ب اػتفبد تشو ٥ جا ٣ اص ا ٤ ا د ط دس HuH-7 snrna-u6 mir-16 دس HepG2 ت ت ت ٥ بس ؿاشا ٤ ي پب ٤ اذاستش ٢ داسد. دس ك ست اػتفبد اص ش د سد ٠ ػ ٣ دس ٤ ه ب ؼا اػاتفبد ٠ تشو ٥ ج ٣ اص ش د ا ٤ ط ب ثشا ٢ وب ؾ خ ب بػت اػت. ا جت دس ا ٤ ب ؼ ب س و دس تب ٤ ح ب ذ ٣ ؿ د ثشسػا ٣ تغ ٥٥ شات ث ٥ اب mir-29a ؼاجت ثا ط اب ٢ ٤ اب mir-16 U6 تشو ٥ ج ٣ اص آ ب تفب ت ٣ دس ت ٥ د ٥ ش ٢ اص تغ ٥٥ شات ؼج ٣ ث ٥ ب ا ٤ ط ذاؿت. ا ٤ ؼئ ٣ ت ا اذ بؿا ٣ اص اخات ف وا ثا ٥ اب ت ب ٢ خت ف ا ٤ ط ب ث ػ ا ا و تاش دس صاد ثبؿاذ. شچ ب ؼبت ث ٥ تش ثشسػ ٣ ث ٥ ب ٥ ف ػ ٥ ؼ ٣ اص ط اب ٢ snrna اب snorna اب mir اب ٢ د ٤ اش ت ات ت ٥ ابس ب و سو ٥ تب ٤ ح دل ٥ كتش ٢ سا دس پ ٣ خ ا ذ داؿت. تب ٤ ح ا ٤ ت م ٥ ك ٣ ت ا ذ پب ١٤ ب ؼبت شتجي ثب اثش ب و سو ٥ س ٢ ث ٥ ب ط بmiR٢ دس ػش ب وجذ لشاس ٥ شد. تىش لذسدا ٣ ت م ٥ اك ابهاش ثخا ٣ اص پب ٤ اب ب ا وبسؿ بػا ٣ اسؿاذ دا اد ٣٤ ل ة ش ط ت ٥ ه دا ىذ ػ ص ٤ ؼت ٣ دا ب تشث ٥ ت ذسع اػت و ثب ا ب ٤ ت ب ٣ ا ىب بت آ دا ا ب ك ست شفت. ثب ػپبع اص و ٥ اػوب ٢ ش ط ت ٥ ه دا اىذ ػ ا ص ٤ ؼات ٣ دا ا ب تشث ٥ ت ذسع ث ت ب ٣ مم ٥ ؼ ٥ ش مبث ثب ػش ب تمذ ٤ ٣ شدد. مىابع [1] Cullen BR. Derivation and function of small interfering RNAs and micrornas. Virus Res 2004; 102(1): 3-9. [2] Liu X, Fortin K, Mourelatos Z. MicroRNAs: biogenesis and molecular functions. Brain Pathol 2008; 18(1): 113-21. [3] Lee RC, Feinbaum RL, Ambros V. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14. Cell 1993; 75(5): 843-54. [4] Reinhart BJ, Slack FJ, Basson M, Pasquinelli AE, Bettinger JC, Rougvie AE, Horvitz HR, Ruvkun G. The 21-nucleotide let-7 RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegans. Nature 2000; 403(6772): 901-6. [5] Brennecke J, Stark A, Russell RB, Cohen SM. Principles of microrna-target recognition. PLoS Biol 2005; 3(3): e85. [6] Garofalo M, Croce CM. micrornas: Master regulators as potential therapeutics in cancer. Annu Rev Pharmacol Toxicol 2011; 51: 25-43. [7] Esquela-Kerscher A, Slack FJ. Oncomirs - micrornas with a role in cancer. Nat Rev Cancer 2006; 6(4): 259-69. [8] Lu J, Getz G, Miska EA, Alvarez-Saavedra E, Lamb J, Peck D, Sweet-Cordero A, Ebert BL, Mak RH, Ferrando AA, Downing JR, Jacks T, Horvitz HR, Golub TR. MicroRNA expression profiles classify human cancers. Nature 2005; 79 Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), N0. 1 9;
میىا زماوی ي مکاران 80 435(7043): 834-8. [9] Babashah S, Soleimani M. The oncogenic and tumour suppressive roles of micrornas in cancer and apoptosis. Eur J Cancer 2011; 47(8): 1127-37. [10] Yao Z, Mishra L. Cancer stem cells and hepatocellular carcinoma. Cancer Biol Ther 2009; 8(18): 1691-8. [11] Meng F, Henson R, Wehbe-Janek H, Ghoshal K, Jacob ST, Patel T. MicroRNA-21 regulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer. Gastroenterology 2007; 133(2): 647-58. [12] Coulouarn C, Factor VM, Andersen JB, Durkin ME, Thorgeirsson SS. Loss of mir-122 expression in liver cancer correlates with suppression of the hepatic phenotype and gain of metastatic properties. Oncogene 2009; 28(40): 3526-36. [13] Gramantieri L, Fornari F, Ferracin M, Veronese A, Sabbioni S, Calin GA, Grazi GL, Croce CM, Bolondi L, Negrini M. MicroRNA-221 targets Bmf in hepatocellular carcinoma and correlates with tumor multifocality. Clin Cancer Res 2009; 15(16): 5073-81. [14] Su H, Yang JR, Xu T, Huang J, Xu L, Yuan Y, Zhuang SM. MicroRNA-101, down-regulated in hepatocellular carcinoma, promotes apoptosis and suppresses tumorigenicity. Cancer Res 2009; 69(3): 1135-42. [15] Wang B, Majumder S, Nuovo G, Kutay H, Volinia S, Patel T, Schmittgen TD, Croce C, Ghoshal K, Jacob ST. Role of microrna-155 at early stages of hepatocarcinogenesis induced by choline-deficient and amino acid-defined مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 diet in C57BL/6 mice. Hepatology 2009; 50(4): 1152-61. [16] Xiong Y, Fang JH, Yun JP, Yang J, Zhang Y, Jia WH, Zhuang SM. Effects of microrna-29 on apoptosis, tumorigenicity, and prognosis of hepatocellular carcinoma. Hepatology 2010; 51(3): 836-45. [17] Braconi C, Valeri N, Gasparini P, Huang N, Taccioli C, Nuovo G, Suzuki T, Croce CM, Patel T. Hepatitis C virus proteins modulate microrna expression and chemosensitivity in malignant hepatocytes. Clin Cancer Res 2010; 16(3): 957-66. [18] Pineau P, Volinia S, McJunkin K, Marchio A, Battiston C, Terris B, Mazzaferro V, Lowe SW, Croce CM, Dejean A.. mir-221 overexpression contributes to liver tumorigenesis. Proc Natl Acad Sci U S A 2010; 107(1): 264-9. [19] Teiten MH, Eifes S, Dicato M, Diederich M. Curcumin-the paradigm of a multi-target natural compound with applications in cancer prevention and treatment. Toxins (Basel) 2010; 2(1): 128-62. [20] Babaei E, Sadeghizadeh M, Hassan ZM, Feizi MA, Najafi F, Hashemi SM. Dendrosomal curcumin significantly suppresses cancer cell proliferation in vitro and in vivo. Int Immunopharmacol 2012; 12(1): 226-34. [21] Tahmasebi Mirgani M, Isacchi B, Sadeghizadeh M, Marra F, Bilia AR, Mowla SJ, Najafi F, Babaei E. Dendrosomal curcumin nanoformulation downregulates pluripotency genes via mir-145 activation in U87MG glioblastoma cells. Int J Nanomedicine 2014; 9: 403-17. [22] Sarbolouki MN, Parsaee S, Kosary P. Mixed :7
شن کىترل درينزاد در مطالعات بیان mir ا تحت تیمار با ک رک میه 81 micelle proliposomes for preparation of liposomes containing amphotericin B, in-vitro and ex-vivo studies. PDA J Pharm Sci Technol 2000; 54(3): 240-6. [23] Sadeghizadeh M, Ranjbar B, Damaghi M, Khaki L, Sarbolouki MN, Najafi F, Parsaee S, Ziaee AA, Massumi M, Lubitz W, Kudela P, Paukner S, Karami A. Dendrosomes as novel gene porters-iii. J Chem Technol Biotechnol 2008; 83: 912-20. [24] Sarbolouki MN, Sadeghizadeh M, Yaghoobi MM, Karami A, Lohrasbi T. Dendrosomes: a novel family of vehicles for transfection and therapy. J Chem Technol Biotechnol 2000; 75: 919-22. [25] Alizadeh AM, Khaniki M, Azizian S, Mohaghgheghi MA, Sadeghizadeh M, Najafi F. Chemoprevention of azoxymethane-initiated colon cancer in rat by using a novel polymeric nanocarrier--curcumin. Eur J Pharmacol 2012; 689(1-3): 226-32. [26] Tahmasebi Mirgani M, Sadeghizadeh M, Najafi F, Mowla SJ. Dendrosomal curcumin induced apoptosis by suppression of pluripotency genes in 5637 bladder cancer cells. Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, 2013; 16(1): 23-39. (Persian) [27] Panahi A, Nakhaisistani R, Sadeghizadeh M. Evaluation of Apoptosis Induction on Gastric cancer AGS Cells Made by Polymer Nano Curcumin. Police Teb J 2012; 3(1): 200-7. (Persian) [28] Zamani M, Sadeghizadeh M, Behmanesh M. Dendrosomal curcumin upregulates the expression of long non-coding RNA gene MEG3 in U87MG glioblastoma cells. Modares Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol. 18 (2015-2016), N0. 1 Journal of Medical Sciences: Pathobiology., 2014. In press. (Persian) [29] Vandesompele J, De Preter K, Pattyn F, Poppe B, Van Roy N, De Paepe A, Speleman F. Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes. Genome Biol 2002; 3(7): RESEARCH0034. [30] Warrington JA, Nair A, Mahadevappa M, Tsyganskaya M. Comparison of human adult and fetal expression and identification of 535 housekeeping/maintenance genes. Physiol Genomics 2000; 2(3): 143-7. [31] Takamizawa J, Konishi H, Yanagisawa K, Tomida S, Osada H, Endoh H, Harano T, Yatabe Y, Nagino M, Nimura Y, Mitsudomi T, Takahashi T. Reduced expression of the let-7 micrornas in human lung cancers in association with shortened postoperative survival. Cancer Res 2004; 64(11): 3753-6. [32] Pineles BL, Romero R, Montenegro D, Tarca AL, Han YM, Kim YM, Draghici S, Espinoza J, Kusanovic JP, Mittal P, Hassan SS, Kim CJ. Distinct subsets of micrornas are expressed differentially in the human placentas of patients with preeclampsia. Am J Obstet Gynecol 2007; 196(3): 261.e1-6. [33] Iorio MV, Visone R, Di Leva G, Donati V, Petrocca F, Casalini P, Taccioli C, Volinia S, Liu CG, Alder H, Calin GA, Ménard S, Croce CM. MicroRNA signatures in human ovarian cancer. Cancer Res 2007; 67(18): 8699-707. [34] Mattie MD, Benz CC, Bowers J, Sensinger K, Wong L, Scott GK, Fedele V, Ginzinger D, Getts R, Haqq C. Optimized high-throughput microrna expression profiling provides novel :7
میىا زماوی ي مکاران biomarker assessment of clinical prostate and breast cancer biopsies. Mol Cancer 2006; 5: 24. [35] Calin GA, Corce CM. MicroRNA signatures in human cancers. Nat Rev Cancer 2006; 6: 857-66. [36] Peltier HJ, Latham GJ. Normalization of microrna expression levels in quantitative RT- PCR assays: identification of suitable reference RNA targets in normal and cancerous human solid tissues. RNA 2008; 14(5): 844-52. [37] Davoren PA, McNeill RE, Lowery AJ, Kerin MJ, Miller N. Identification of suitable endogenous control genes for microrna gene expression analysis in human breast cancer. BMC Mol Biol 2008; 9: 76. [38] McDermott AM, Kerin MJ, Miller N. Identification and validation of mirnas as endogenous controls for RQ-PCR in blood specimens for breast cancer studies. PLoS One 2013; 8(12): e83718. 82 مجل عل م پسشکی مدرس: آسیب شىاسی زیستی دير 18 شمار 1 ب ار 1314 :7